组织醛固酮在肾间质纤维化过程中作用实验研究.pdf

中国协和医科大学博士研究生论文 缩略语表 4 中国协和医科大学博士研究生论文 中文摘要 组织醛固酮在肾间质纤维化过程中作用的实验研究 研究背景 肾间质纤维化的慢性进展目前尚无有效控制措施。因此，寻找肾问 质纤维化致病因子以及针对其发病机制的研究方兴未艾。醛固酮 (aldosterone ALDO)作为调节机体水盐代谢平衡的一种内分泌激素 已为人熟知。近年来，醛固酮与脏器纤维化的研究又取得了突破性进展。 研究证实，醛固酮可以作为独立致病因子促进心脏和血管纤维化的发生 和发展；此外，脑组织、心脏、血管内皮细胞等肾上腺外组织也证实具 有合成醛固酮的能力，这种局部产生的醛固酮被命名为组织醛固酮 (10cal aldosterone)。目前，醛固酮致脏器纤维化的发病机制己成为多 学科的研究热点，同时，分子生物学研究方法的进步使疾病发生过程中 细胞信号转导特征受到普遍关注。迄今为止，对醛固酮在肾间质纤维化 的过程中的致病机制及该病理机制的信号转导途径尚知之甚少。我们拟 利用体外细胞生物学实验对上述问题进行深入研究。 研究目的 一．观察肾小管上皮细胞系(HKC)是否具有合成组织醛固酮的能力并 观察内皮素．1是否可以促进该细胞合成醛固酮。 二．首先观察外源性及内源性醛固酮对体外培养的HKC合成致肾间质 纤维化致病园子TGF．Bl的影响：然后观察被外源性醛固酮活化的 HKC对h刚Fs产生COL．I的影响。 三．观察MAPK信号转导途径各支通路是否介导醛固酮促进HKc产生 TGF一61的作用。 研究方法 一．体外培养的HKC进行试验，放射免疫方法检测。f1)刺激试验：观察 HKC细胞受不同浓度和不同作用时间的ET-l刺激后，ALD0及血管 条件，观察不同浓度和不同作用时间的血管紧张素转换酶抑制剂 (ACEI)对HKc生成ALDO及AngⅡ的影响。 中国协和医科大学博士研究生论文 二．采用体外细胞培养及共培养进行试验。f1)不同浓度及不同作用时间 及蛋白质表达。(2)不同浓度及不同作用时间的安体舒通与内皮素一l 用外源性ALDO活化的HKC与h姒Fs共培养(培养液中加或不加抗 TGF．8l抗体)，ELISA方法检测l埘Fs的CoII合成量。 三．体外培养的HKC进行试验，(1)用不同浓度MAPK各支通路的特异 性阻滞剂预孵育细胞，再以醛固酮刺激舣C，ELIsA方法检测 TGF-pl合成量出现的变化。(2)用不同浓度及不同作用时间的外源性 醛固酮刺激HKc2h，观察MAPK各支通路磷酸化程度的改变。 研究结果 II。E■l 一．(1)未加任何刺激的HKC细胞能产生基础量ALDO及Ang 刺激后ALD0及AngII的生成量均呈剂量依赖及时间依赖性增 显著高于O 组(PO．05或0．01)。 量显著减少(与Omol／LACEI组比较P0．叭)，但是，此浓度的 ACEI虽能完全阻断AngII生成，却未能完全阻断ALDO生成； 用lO‘7m01／LET-1与10。5mol／L AcEI共同孵育HKC细胞，并在 能完全阻断AngII生成，却不能完全阻断ALDO生成。 二．(1)外源性ALD0使TGF．D1表达呈剂量依赖及时间依赖性增加。 平作用48h)TGF．Bl表达量较0m01／LALDO组显著升高(PO．05 中国协和医科大学博士研究生睑文 著高于Oh组fPO．05或O．01)。 (2)安体舒通使TGF．B1表达呈剂量及时问依赖性减少。10一、10。1 m01几安体舒通组(州刚A水平作用