天然产物以和寡脱氧核苷酸的质谱分析方法研究.pdf

THESISOFPh．D．DEGREE !!!!!兰!竺生!型型丝型竺!i!：!竺苎!!丝坚!竺竺竺型型!型!型型 架及取代基的不同在质谱裂解行为上反映出明显的差异。例如，不同的结构骨架， 通过RDA开裂反应产生的子离子存在差异；C．14的取代基对于[M+H]+离子的裂 解行为有显著影响：而且芳香环上取代基的不同导致产生不同的子离子，当C．6 和C．7位同为甲氧基取代时，产生丢失CH4的子离子，当C．6位为羟基，C．7 位为甲氧基取代时，产生丢失CH3·的子离子。本研究表明MS／MS谱能有效地反 映该类化合物的结构特征和裂解行为之间的关系，并为分析相关同类成分的结构 提供可靠的分析依据。另外，结合LC．UV技术分析发现不同骨架的化合物，其 紫外吸收光谱也存在显著差异，这也可以作为结构分析的依据。 的分析 成分(Ml～M5)，并推测了其结构，用LC-NMR方法验证了其中四个成分的最终 为新结构(Wl、w2、w6和w7)。 3．黄连中常量及微量生物碱成分分析及其结构解析 首先，采用ESI．MS／MS法对药用植物黄连中主要的原小檗碱类生物碱：黄 连碱、药根碱、小檗碱和棕榈碱的质谱裂解规律进行了细致探讨。掌握了该类生 物碱的结构(主要是取代基种类)与裂解行为之间的相关性。然后，利用多种质 性提取物HLRT843中的主要成分，确定了其中一个主要成分(x1)两个微量成 构。 II THESISOFPhDDEGREE 坐!!竺!!竺丝型堑丝丝型兰竺竺!：丝竺鲨塑竺竺竺型生!暨 4．脱氧单核苷和脱氧二核苷酸在㈩ESI．MS及其MS／MS谱中的质谱行为 X=Na+．K+)的MS／MS谱中发现有趣的裂解特征。 ESI．MS／MS谱中的裂解行为。发现其裂解反应主要取决于碱基的种类和序列， 而且碱金属离子种类(如Na+、K+)也产生一定的影响，同一分子中[M+H】+、 子的【M+H]+离子均以失去5’．端碱基或同时丢失5’．端碱基和一分子核糖为主。而 Na+主要通过取代磷酸基上的H质子与脱氧二核苷酸结合，并发现Na+离子与嘧 啶碱基的结合力比嘌呤碱基强，『M+Na]+离子的裂解反应由碱基的序列以及碱基 与Na十离子之间相互作用的位置所决定。K+离子由于自身的体积大，造成的立体 位阻比Na+离子大，因此，发现[M+K】+离子的裂解反应主要由碱基的序列、K+ 离子与碱基之间的结合位点、以及由碱基和K+产生的立体位阻所决定。因此， 在其MS／MS谱中观察到一些特征有趣的裂解反应。 5．脱氧四核苷酸的裂解行为及其与碱金属离子的相互作用 和d(TGAC)的裂解行为。发现失去中性碱基或产生质子化碱基及随后发生的骨 架裂解是这四个脱氧四核苷酸裂解主要的方式。从[M+H】+离子上脱去中性碱基 通过骨架断裂产生可提供结构信息的子离子是另一个重要的裂解方式。研究发现 III THESISOFPh．D．DEGREE 垡竺竺!竺生型型．丝丝型兰塑!坚生丝g竺竺丝丝型鱼鳖 相同的碱基位于5-末端比在3-末端更容易从分子上脱去，3’C．O磷酸酯键比 5’C-O磷酸酯键更容易发生断裂，这是由于3’．末端碱基通过与磷酸形成氢键而 得以稳定。还发现碱基种类对于所连接的脱氧核糖上3’C．O键的断裂产生重要影 响，当脱氧核糖上连接T碱基时，其3’C-．O键很难发生断裂产生w系列离子， 而当其连接其它碱基时，则3’C．O键更易断裂。 将脱氧四核苷酸与不同浓度的NaCl和KCl混合制成不同溶液体系，考察了这 些溶液中所含复合离子的丰度。发现脱氧核苷酸分子与不同数目金属离子产生的 复合离子相对强度随着金属离子浓度的改变呈现规律性变化。而且，金属离子不 仅可以与磷酸基相互结合，还可与分子中碱基或核糖等其它基团结合。进一步考 发现Na十和K+均与脱氧核酸分子中嘧啶碱基结合力强，但复合作用存在一定的差 异，从而造成不同的裂解行为。 THESIS0FPh．D D￡GREE Chinese Union