流式细胞术系列之用ModFit软件DNA倍体和细胞周期预案.pptVIP

DNA倍体和细胞周期分析 DNA检测的常用术语 表示流式分析中DNA含量的分辨率或精确度。 通常由G0/G1峰的CV来反映【 %CV=（SD/mean）x 100】。 影响CV的因素主要包括两方面：仪器因素（如液流、光路、机器调试等）和样本制备及染色过程对标本的人为影响。 结果分析 CellQuest、WinMDI等软件均可以进行分析，但需要手工进行参数统计和计算； 推荐使用ModFit分析软件（分析如下：） 1、打开软件； 2、在FL2-W/FL2-A散点图中设定单个细胞门（R1），去除聚集细胞，必要时可以设两个门。 3、在FL2-A直方图中显示R1中细胞的DNA含量直方图 注：该软件可以自动分析，也可手动分析；可以分析凋亡、异倍体、各期比例等；结果均自动计算。 * 细胞周期和DNA倍体分析的原理 G0/G1期DNA含量为2C S期细胞,DNA含量开始增加,2C G2/M期细胞,DNA含量开始增加至4C 1、正常细胞DNA含量稳定在2C水平 2、性细胞DNA含量为1C 3、处于增殖期至分裂期细胞由 2C增加至4C 4、凋亡细胞DNA断裂,含量2C 细胞经荧光染料(碘化丙啶，PI)染色，用流式细胞仪测定细胞DNA含量，可得到细胞周期三个时相(G0/G1、S和G2/M期)的DNA含量（％），可以反映细胞的增殖状态和非二倍体（异倍体）的DNA含量 Diploid: