机能学实验设计概论.ppt

* 范 姝 琳 范 姝 琳 谢 佳男 范 姝 琳 谢 佳男 赵 莉佩 赵 莉佩 田 佳怡 指导教师：纪影实 指导教师：纪影实 氢化可的松通过抑制氧化应激而发挥脑缺血保护作用的研究。 研究背景 脑缺血 现在，临床上已研发出多种对脑缺血具有保护作用的药物，目的是消除缺血期间生化紊乱、防止缺血再灌注损伤、为溶栓治疗争取更多的时间。 脑缺血是大脑血液供应不足时出现的一种症状。脑缺血时，可引起大脑的一系列生理变化，如：线粒体能量代谢障碍、神经递质失调、钙超载和酸碱平衡紊乱等。这些生理变化都将使脑受到严重的损伤，而引起神经系统功能障碍。 研究背景 脑缺血损伤机制 现在，临床上已研发出多种对脑缺血具有保护作用的药物，目的是消除缺血期间生化紊乱、防止缺血再灌注损伤、为溶栓治疗争取更多的时间。 脑缺血是大脑血液供应不足时出现的一种症状。脑缺血时，可引起大脑的一系列生理变化，如：线粒体能量代谢障碍、神经递质失调、钙超载和酸碱平衡紊乱等。这些生理变化都将使脑受到严重的损伤，而引起神经系统功能障碍。 脑缺血损伤的机制十分复杂，有多种因素参与，诸如钙超载、兴奋性氨基酸毒性作用、氧自由基的毒性作用等。随着对自由基研究的深入，人们逐渐证实自由基连锁反应是脑缺血的核心病理环节。 自由基: 外层轨道具有不配对电子的院子、原子团、例子和分子统称为自由基。自由基通常性质比较活跃，能与多种生物分子反应从而改变这些大分子的理化性质。人体内的自由基主要有超氧阴离子（O2—）、羟自由基（OH—）、烷自由基、一氧化氮自由基等。 脑缺血 脑缺血 一氧化氮自由基的来源 -------- 一氧化氮合酶途径（NOS） NOS广泛存在于各种类型的细胞中，它可以催化L-精氨酸和分子氧化反应生成一氧化氮自由基（NO）。现已确定NOS亚型有3种，根据原形酶的组织来源不同分别成为内皮细胞型NOS（eNOS）、脑神经元型NOS（nNOS）和诱导型NOS（iNOS），其中iNOS在缺血、缺氧、细胞损伤和炎性反应的激活下表达增强，产生释放大量的NO。NO能与O2—反应生成过氧亚硝酸盐（ONOO—），后者不稳定，质子化生成过氧亚硝酸盐（ONOOH），再分解生成OH—和NO2，具有神经毒性。 氢化可的松 氢化可的松，作为一线抗炎药，近年来被发现对脑缺血具有保护作用。有国外研究显示，糖皮质激素可抑制细胞内iNOS mRNA表达，从而减少NO的释放。 国内外研究进展 国内外研究进展 国内外研究进展 探究氢化可的松是否通过抑制细胞内iNOS mRNA表达、减少NO的释放，而发挥对脑缺血的保护作用。 实验目的 探究氢化可的松是否通过抑制细胞内iNOS mRNA表达、减少NO的释放，而发挥对脑缺血的保护作用。 实验目的 意义 探究氢化可的松治疗脑缺血的机制，为研究新药提供新思路。 意义 探究氢化可的松治疗脑缺血的机制，为研究新药提供新思路。 创新点 氢化可的松发挥脑缺血保护作用的新机制！ 实验材料与方法 1.1 药品与试剂 氢化可的松、MDA试剂盒、Griess试剂盒 1.2 主要仪器设备 分光光度计、组织匀浆器、2ml EP管、37度孵箱 1.3 动物及分组 健康雄性成年小鼠20只，体重28~32g 分为3组：假手术组；缺血组；给药组， 1. 实验材料 1.1 药品与试剂 氢化可的松、MDA试剂盒、Griess试剂盒 1.2 主要仪器设备 分光光度计、组织匀浆器、2ml EP管、37度孵箱 1.3 动物及分组 健康雄性成年小鼠20只，体重28~32g 分为3组：假手术组；缺血组；给药组， 1. 实验材料 2.1 模型制备 将小鼠乙醚吸入全身麻醉后仰背位固定于手术板上，颈前去除被毛、消毒，皮肤正中开口，钝性剥离颈总动脉以及迷走神经，每侧备线2根，分别结扎，当第三根线结扎完时开始计时，然后在两根线中间将颈总动脉剪断，缝合切口，假手术组只剥离颈总动脉不接扎。手术结束后迅速松开小鼠。 2. 实验方法 实验材料与方法 2.1 模型制备 将小鼠乙醚吸入全身麻醉后仰背位固定于手术板上，颈前去除被毛、消毒，皮肤正中开口，钝性剥离颈总动脉以及迷走神经，每侧备线2根，分别结扎，当第三根线结扎完时开始计时，然后在两根线中间将颈总动脉剪断，缝合切口，假手术组只剥离颈总动脉不接扎。手术结束后迅速松开小鼠。 2.2 存活时间、存活率的测定 模型制作完成后，立即开始记时，记录6h内死亡的动物数，计算存活率，记录死亡动物的存活时间。 2.