基因的序列概论.pptVIP

放射自显影 ：根据四泳道的编号和每个泳道中DNA带的位置直接从自显影图谱上，就可以一段DNA序列。读出与模板链互补的新链序列。 * 光胶质量完全依赖于质量，直接影响序列结果！ * 毛细管电泳，是一类以毛细管为分离通道、以高压直流电场为驱动力的新型液相分离技术。毛细管电泳实际上包含电泳、色谱及其交叉内容，它使分析化学得以从微升水平进入纳升水平，并使单细胞分析，乃至单分子分析成为可能。长期困扰我们的生物大分子如蛋白质的分离分析也因此有了新的转机 * 在任何短片段或中等片段DNA序列需要高精度和定量分析的时候，我们知道焦磷酸测序技术是一种测序技术，DNA序列的分析，结合相应仪器系统与软件系统，可以做相关SNP的检测工作！三个应用进行简单的说明。DNA序列分析技术，有一些优点，测序长度大约在20-150bp，那么这么段在工作种有什么意义！在实验种有什么意义，实际上很常用，需要这种短的DNA分析技术，比如细菌的分型，病毒分型，突变检测。对短的DNA片段的序列分析。分类DNA,扩展把序列，测序，这个反应需要1h。不是对一个样板，而是对500个样本进行分析，通量相当高的！ * ATP的分子简式是：A—P～P～P（板书），A：代表腺苷（腺苷是由腺瞟吟和核糖组成的，有关腺膘吟的知识将在以后的学习中再研究）；P：代表磷酸基团；～：代表高能磷酸键，是一种特殊的化学键。 ATP的水解实际上是指ATP分子中高能磷酸键的水解，高能磷酸键水解时释放的能量是一般磷酸键水解时释放能量的两倍以 * * 这个上面是待测序的DNA模版，下面式测序引物。焦磷酸测序技术是一个酶系统，包括4种酶，聚合酶，硫酸化酶，注意！待测模版第一个碱基是G,如果这时候加入Dctp，C与G互补配对，所以聚合酶可以催化ctp掺入DNA连中，这时候有一个焦磷酸脱落下来！！这时候焦磷酸与APS在硫酸化酶的左右下合成ATP。在ATP与荧光素酶的作用下呢，正常的荧光素就可以变成氧化荧光素，一旦从正常氧化状态就发生荧光。从我刚才讲解的内容，我们可以看到，焦磷酸测序有一个很重要的特点，在每一轮的反应中，只加入一种dNTP.我们知道dNTP有四种，所以我们可以推测，如果加入的dNTP正确的化，硫酸化酶，荧光素酶的催化反应就能正常反应，最后有光线的产生！如果dNTP掺入错误的话，聚合酶就不能催化dNTP与模版的合成，这样的化就没有焦磷酸的产生，后续的硫酸化酶和荧光素酶的催化反应就不能正常的进行，也就没有荧光的产生。这就是焦磷酸测序的基本原理！！我们知道，在每一论反应加入dNTP都是过量的，这一轮反应还生产ATP.那么在加入下一轮的反应的时候，前一轮过量的DNTP,与生成的ATP要进行降解，这个酶就是三磷酸腺苷双磷酸酶！！这个时候就可以加入下一种碱基！！每一论反应如果有一个光信号峰形成，光信号由CCD摄像机检测并由软件pyrogram?反应为峰。每个光信号的峰高与反应中掺入的核苷酸数目成正比 * 我们拿一个具体的焦磷酸测序的结果的序列为例来具体分析一下焦磷酸测序的基本原理！下面的横坐标反应的是每一论反应加入的dNTP类型。第一轮加入的是dcTP.第二轮反应加入的是dttp，第三轮反应加入的是dccp。我们看这一轮反应加入dccp。这一轮反应无光信号，说明加入的dCTP是不对的。没有掺入反应，所以没有光信号产生。我们在看这一论反应，这一轮反应不仅有光信号产生，而且光信号峰高要高，说明不仅有一个DCTP被掺入，也就是在模版上有大于一个G,那么根据软件分析峰高，有两个高度的峰值，说明模版上有两个GG.有的同学可能会问？那么软件可以判断掺入多少个，如果连续少于5个，软件可以判断，如果大于5个，软件可以无法正确读入。那么如果加入 * * * 新的技术，可以检测SNP位点，也可以检测纯合子和杂合子。两条染色体，一条染色体是A,一条染色体是G 基本特点：实验湿目前主要采取的是桑格法，但是焦磷酸测序与桑格法是有明显区别的！. 价格是不是很贵呢～～DNA片段荧光标记，机器种要有激发荧光的相关设备。 我们知道焦磷酸测序技术是一种测序技术，DNA序列的分析，结合相应仪器系统与软件系统，可以做相关SNP的检测工作！三个应用进行简单的说明。DNA序列分析技术，有一些优点，测序长度大约在20-150bp，那么这么段在工作种有什么意义！在实验种有什么意义，实际上很常用，需要这种短的DNA分析技术，比如细菌的分型，病毒分型，突变检测。对短的DNA片段的序列分析。分类DNA,扩展把序列，测序，这个反应需要1h。不是对一个样板，而是对500个样本进行分析，通量相当高的！ 第二个应用，在SNP种的应用，单核苷酸多态性，作为一种遗传标志物来研究的，后基因组主要工作。遗传密码上单个碱基的突变，主要指单独换，可以遗传的，成为SNP的。个体间差异的一