第二章 氨基酸与蛋白质的一级结构-d.ppt

蛋白质的化学组成 元素组成：碳、氢、氧，还有氮和少量硫等 C 50~55% H 6~8% O 20~23% N 15~18% S 0~4% 有些蛋白质还含有P、Fe、Cu、Mn、Zn、Se等。 各种蛋白质含氮量接近，平均为16%，N是特征元素。 1克氮相当于6.25克蛋白质为测定样品中蛋白质含量的依据。 凯氏定氮法测定蛋白质含量： 蛋白质含量=蛋白氮×6.25 三聚氰胺风波 氨基酸的构型 氨基酸的旋光性 蛋白质中常见氨基酸的结构 氨基酸的结构 氨基酸的结构 氨基酸的结构 氨基酸的结构 氨基酸的结构 氨基酸的结构 氨基酸的结构 氨基酸的结构 氨基酸的结构 氨基酸的结构 氨基酸的结构 氨基酸的结构 氨基酸的结构 氨基酸的结构 氨基酸的结构 氨基酸的结构 氨基酸的结构 氨基酸的结构 氨基酸的结构 口诀 甘丙缬亮异亮酸，中性一羧又一氨。 丝苏氨酸加羟基，含硫酸为半胱蛋。 一氨二羧天冬谷，赖二氨基精胍基。 用过量的中性甲醛与氨基酸反应，可游离出氢离子，然后用NaOH滴定，从消耗的碱量可以计算出氨基酸的含量。此法称为间接滴定法 几种生物活性肽 1. 谷胱甘肽(glutathione, GSH) GSH具有重要的功能： 1 ） 解毒功能：与重金属离子、环氧化物（致癌物）结合排出体外。 2 ） 维持红细胞膜的完整性。 3 ） 参与高铁血红蛋白的还原作用。 4 ） 促进铁的吸收。 十二烷基磺酸钠 原态蛋白质 变性 ？ 磺酸基 极性亲水 烷基 亲油（蛋白质疏水区） 变性 可逆变性-恢复活性 去除变性因素后，变性蛋白恢复原来的空间结构，恢复生物活性的现象。 本质—一级结构决定高级结构 提问：是否所有的蛋白质变性都是可逆的？为什么？ 理论上可以，但很难使外界因素完全复原 变性作用具有实际意义 防止病虫害、消毒、灭菌 豆腐制作：大豆蛋白质的浓溶液加热加盐制成变性蛋白质凝固体。 临床化验：变性除去杂蛋白。血清中的蛋白成分，可加入三氯乙酸沉淀去掉。 衰老过程，相应的蛋白质逐渐变性，亲水性减弱 制备和保存蛋白质制品，应防止变性。 六、紫外吸收 大部分蛋白质均含有带芳香环的苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸。 这三种氨基酸的在280nm 附近有最大吸收。因此，大多数蛋白质在280nm 附近显示强的吸收。 利用这个性质，可以对蛋白质进行定量分析和定性鉴定 七、颜色反应 双缩脲反应 碱性溶液中，双缩脲与硫酸铜结合，生成紫红色物质的反应。（凡是含两个或两个以上肽键的化合物都具有这个反应）。此反应用来定性或定量（540nm）测定蛋白质。 酚试剂反应： 蛋白质分子的酪氨酸中的酚基将福林试剂（磷钨酸、磷钼酸、硫酸铜）中的磷钨酸及磷钼酸还原成蓝色化合物（650nm）。该反应常用于定量测定蛋白质的含量 第六节：蛋白质的分离、提纯与鉴定 研究或是生产的需要，都涉及蛋白质的分离纯化。目前对蛋白质的制备，不管是从传统的生物组织中提取，还是运用DNA重组技术，最后要得到这些蛋白质，仍然涉及分离、纯化问题 分离纯化的一般原则：根据蛋白质性质如分子大小、溶解度、电荷、吸附性来设计分离纯化方法 原料来源要方便，蛋白质含量要高 防止蛋白质变性。PH，温度、缓冲液、有关基团的氧化、还原 注意蛋白水解酶的作用，抑制微生物的生长，酶活性的金属离子 建立灵敏、特异、精确的检测方法 基本步骤――分离纯化的战略 取材。 组织细胞破碎。 机械法：匀浆器、细菌磨；物理法：超声波、渗透压、压榨；化学法：酸、碱等处理；酶法：溶菌酶、纤维素酶。 提取。选用适当的溶剂进行。 分离纯化。 根据待分离蛋白质的特异理化性质（溶解度、电荷性质、相对分子质量、特异亲和力等）设计分离纯化方法。 盐析与等电点沉淀 离子交换层析 凝胶过滤 亲和层析 鉴定。 对所制得的蛋白质产品进行纯度、含量、相对分子质量等的鉴定和分析测定，方法：电泳法、色谱法、定氮法及分光光度法 离子交换层析 凝胶过滤 亲和层析 肌球蛋白 半乳糖苷酶 糖原磷酸化酶 牛血清蛋白 卵清蛋白 碳酸酐酶 大豆胰蛋白酶