1.1生物DNA重组技术的基本工具.ppt

专题1 基因工程 基因工程又叫基因拼接技术或DNA重组技术。该技术是在生物体外，通过对DNA分子进行人工“剪切”和“拼接”，对生物的基因进行改造和重新组合，然后导入受体细胞内，使重组基因在受体细胞内表达，产生出人类所需要的基因产物。 什么是基因工程？ 基因工程 基因工程的别名 操作环境 操作对象 操作水平 基本过程 结果 基因拼接技术或DNA重组技术 生物体外 基因 DNA分子水平 剪切→拼接→导入→表达 人类需要的基因产物 基因工程产品 延熟保鲜转基因西红柿 研究者发现，控制植物衰老激素乙烯合成的酶基因，是导致植物衰老的重要基因，如果能够利用基因工程的方法抑制这个基因的表达，番茄就不会容易变软和腐烂了。 抗虫的基因来自苏云金杆菌。苏云金杆菌形成的伴胞晶体是一种毒性很强的蛋白晶体，能使棉铃虫等鳞翅口害虫瘫痪致死。科学家将编码这个蛋白质的基因导入作物，使作物自身具有抵御虫害的能力。 抗虫棉 日本三得利公司2009年10月20日宣布，将于11月3日发售世界上首次培育成功的蓝玫瑰。 　　玫瑰的基因不能编码合成蓝色色素，三得利公司通过把三色紫罗兰的基因植入玫瑰，培育出含蓝色素的玫瑰，售价在2000日元至3000日元。 蓝色妖姬 基础理论和技术的发展催生了基因工程 DNA是遗传物质的证明 DNA双螺旋结构和中心法则的确立 遗传密码的破译 基因转移载体的发现 工具酶的发明 DNA合成和测序技术的发明 DNA体外重组的实现 重组DNA表达实验的成功 第一例转基因动物问世 PCR技术的发明 基础理论 技术发明 DNA重组技术的基本工具 准确切割DNA的工具（“分子手术刀”） ——限制性内切酶 DNA片段的连接工具（“分子缝合针”） ——DNA连接酶 基因转移工具（“分子运输车”） ——运载体 概述：切割DNA的工具是限制性核酸内切酶，又称限制酶。 思考： （1）见寻根问底一； 一、限制性核酸内切酶—“分子手术刀” 分布： 主要在原核生物中 属名 种名 菌株(品系) 大肠杆菌R型菌株分离出的第一个限制酶 Escherichia coli R E co R Ⅰ 种名前两字母 (小写、斜体) 菌株 (品系) 罗马数字区分同一菌株分离出的不同酶 例：流感嗜血杆菌(Haemophilus influenzae)d株系中第二种限制酶的命名： Hind II 粘质沙雷氏菌( Serratia marcescens sb)中第一种限制酶的命名： SmaⅠ 限制酶的命名 属名首字母 (大写、斜体) 原核生物容易受到自然界外源DNA的入侵，限制酶是一种防御工具，当外源DNA侵入时，会利用限制酶将外源DNA切割掉，使之失效，保证自身的安全。 因为含有某种限制酶的细胞，其DNA分子中或不具备这种限制酶的识别序列，或通过甲基化酶将甲基转移到所识别序列的碱基上，使限制酶不能将其切开。 限制酶在原核生物中的作用是什么吗？ 为什么细菌中限制酶不剪切细菌本身的DNA？ 一、限制性核酸内切酶—“分子手术刀” 特点： 限制酶能够识别双链DNA分子的某种特定的核苷酸序列，并且在特定的位点切割DNA分子。（专一性） 例如： 大肠杆菌(E.coli)的EcoRⅠ限制酶能识别GAATTC序列，并在G和A之间切开。 黏性末端 黏性末端 回文序列 如何切割DNA分子呢？ DNA分子 磷酸二酯键 切割DNA分子实质是断开两个核苷酸之间的磷酸二酯键。 一、限制性核酸内切酶—“分子手术刀” CT TCATGAATTCCGTACCCGGGCCTAA GAAGTACTTAAGGCATGGGCCCGGATT EcoRⅠ限制酶酶切位点 GGCATGGG AATTCCGTACCC 黏性末端 CTTCATG GAAGTACTTAA 平末端 SmaⅠ限制酶酶切位点 GGGCCTAA CCCGGATT 切割DNA分子后形成什么呢？ 过程见图1-3 （在中轴线两侧 切割DNA） （在中轴线处切割DNA） 什么叫黏性末端？ 当限制酶从识别序列的中心轴线两侧切开时，被限制酶切开的DNA两条单链的切口，带有几个伸出的核苷酸，他们之间正好互补配对，这样的切口叫黏性末端。 什么叫平末端？ 当限制酶从识别序列的中心轴线处切开时，切开的DNA两条单链的切口，是平整的，这样的切口叫平末端。 DNA连接酶 分子缝合针 切断的DNA片段要与受体细胞的DNA连接，你觉得可以用什么酶？ 能够将两条DNA分链连接起来的酶，称之为DNA连接酶。 1.酶的种类： 二、DNA连接酶—“分子缝合针”