1-2基因工程的基本操作程序(新)2014.ppt

基因工程的基本操作程序 主要是编码蛋白质的结构基因 主要是编码蛋白质的结构基因 主要是编码蛋白质的结构基因 1）农杆菌转化法 ⑴适用范围：双子叶植物和裸子植物； DNA分子杂交示意图 用DNA分子杂交技术可鉴定两个物种之间的亲缘关系的远近。将两种生物的DNA分子的单链放在一起，如果这两个单链具有互补的碱基序列，那么，互补的碱基序列就会结合在一起，形成杂合双链区；在没有互补碱基序列的部位，仍然是两条游离的单链。如果杂合部位多，则亲缘关系近，反之则远。 3、 已知限制酶Ⅰ的识别序列和切点是—G↓GATCC—，限制酶Ⅱ的识别序列和切点是—↓GATC—。根据图示判断下列操作正确的是（ ） 四、目的基因的检测与鉴定 导入过程完成后，全部受体细胞都能摄 入重组DNA分子吗？ 1 真正能摄入重组DNA分子的受体细胞很少。 2 目的基因进入受体细胞后，是否都能稳定维持和表达？ 不一定，需要检测 四、目的基因的检测与鉴定 1、分子水平 检测— 2、个体水平鉴定— ①检测转基因生物染色体的DNA 上是否插入了目的基因 ②检测目的基因是否转录出了mRNA ③检测目的基因是否翻译成蛋白质 抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等 DNA分子杂交 DNA-RNA分子杂交 抗原—抗体杂交 转基因生 物的DNA 含目的基因的DNA单链为探针 15N 15N 14N 14N 基因探针： 放射性同位素等标记的DNA分子 方法—— DNA分子杂交技术 变性 变性 1、鉴定——分子水平的鉴定 变性 方法—— 分子杂交技术 （2）检测目的基因是否转录出了mRNA 探针 15N 15N 转基因生物 的mRNA 14N 14N 1、鉴定——分子水平的鉴定 提取 （3）检测目的基因是否翻译成蛋白质 方法——抗原-抗体杂交 苏云金杆菌 Bt毒素蛋白 将Bt毒蛋白注射小鼠体内 从小鼠血管抽出血液分离出抗Bt毒素的抗体 抗体 蛋白质 出现杂交带 脱分化 组织培养 2、鉴定——个体水平的鉴定 抗虫、抗病接种实验，活性比较实验 　　例：用棉铃饲喂棉铃虫，如虫吃后不出现中毒症状，说明未摄入目的基因或摄入目的基因未表达。如虫吃后中毒死亡，则说明摄入了抗虫基因并得到表达。 四、目的基因的检测与鉴定 1、分子水平 检测— 2、个体水平鉴定— ①检测转基因生物染色体的DNA 上是否插入了目的基因 ②检测目的基因是否转录出了mRNA ③检测目的基因是否翻译成蛋白质 抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等 DNA分子杂交 DNA-RNA分子杂交 抗原—抗体杂交 基因工程的基本操作程序 目的基因的获取 基因表达载体的构建 将目的基因导入受体细胞 目的基因的检测与鉴定 1、从基因文库中获取目的基因 2、利用PCR技术扩增目的基因 3、化学方法人工合成 目的基因 + 启动子 + 终止子 + 标记基因 农杆菌转化法、基因枪法、花粉管通道法、 显微注射法、Ca2+处理法 DNA分子杂交技术 DNA-RNA分子杂交技术 抗原—抗体杂交技术 个体水平鉴定 分子检测 巩固练习: 1.人们常选用的细菌质粒分子往往带有一个抗生素抗性基因,该抗性基因的主要作用是 ( ) A.提高受体细胞在自然环境中的耐药性 B.有利于对目的基因是否导入进行检测 C.增加质粒分子的分子量 D.便于与外源基因连接 2.在遗传工程技术中,限制性内切酶主要用于 ( ) A.目的基因的提取和导入 B.目的基因的提取和检测 C.目的基因与载体的结合和导入 D.目的基因的提取与载体结合 B D 3.在遗传工程技术中,下列何种目的基因一般以直接分离的方法获得 ( ) A.人的胰岛素基因 B.蚕的蚕丝蛋白基因 C.芽孢杆菌的抗虫基因 D.菜豆储藏蛋白基因 4.1976年,美国的科学家首次将人的生长抑制素释放因子的基因转移到大肠杆菌,并获得了表达,此文中的表达是指该基因在大肠杆菌 ( ) A.能进行DNA复制 B.能传递给细菌后代 C.能合成生长抑制素释放因子 D.能合成人的生长素 C C 5.基因工程是在DNA分子水平上进行设计施工的,在基因操作的基本步骤中,不进行减基互补配对的步骤是 ( ) A.人工合成目的基因 B.目的基因与载体结合 C.将目的基因导入受体细胞 D.目的基因的检测和表达 C 原核生物基因表达的调 控 Ｒ