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2.对基因工程步骤的五点说明: (1)限制酶和DNA连接酶的作用部位都是脱氧核苷酸之间的磷酸二酯键,只是前者切开,后者连接。 (2)要想从DNA上切下某个基因,应切2个切口,产生4个黏性末端。 (3)获取目的基因和切割运载体需要用同一种限制酶,目的是产生相同的黏性末端。 (4)将目的基因导入受体细胞,没有涉及碱基互补配对。 (5)动物一般用受精卵作为受体细胞;植物一般用体细胞作为受体细胞,再通过植物组织培养方式形成新个体;微生物常用不致病的大肠杆菌作为受体细胞。 【高考警示】(1)DNA连接酶和DNA聚合酶的作用对象不同。 ①DNA连接酶:作用于两个DNA片段。 ②DNA聚合酶:将单个的脱氧核苷酸连接起来,形成DNA单链。 (2)相同点:这两种酶都是蛋白质,都可以形成两个脱氧核苷酸之间的化学键。 (3)运载体≠质粒:质粒是最常用的运载体,除此之外,λ噬菌体的衍生物和动植物病毒也可作为运载体。运载体的化学本质为DNA,其基本单位为脱氧核苷酸。 【考题回访】 1.(2015·南京模拟)人们试图利用基因工程的方法,用乙种生物生 产甲种生物的一种蛋白质。生产流程是:甲种生物的蛋白质→mRNA 目的基因 与质粒DNA重组 导入乙种生物的细胞中 获得甲种生物的蛋白质。下列说法正确的是( ) A.①过程需要的酶是逆转录酶,原料是A、U、G、C B.②过程要用限制酶切断质粒DNA,再用DNA连接酶将目的基因与 质粒连接在一起 C.如果受体细胞是细菌,可以选用枯草杆菌、炭疽杆菌等 D.④过程中用的原料不含A、U、G、C 【解题指南】解答本题的突破口: (1)①过程是由mRNA获得目的基因的过程,属于逆转录。 (2)④过程是转录和翻译过程。 【解析】选B。①过程是逆转录,利用逆转录酶合成DNA片段,需要的原料是A、T、G、C;②过程是目的基因与质粒DNA重组,需要限制酶切断质粒DNA,再用DNA连接酶将目的基因与质粒连接在一起;将重组质粒导入受体细胞时,如果受体细胞是细菌,则不应该用致病菌,而炭疽杆菌是致病菌;④过程是基因的表达过程,涉及转录和翻译,原料中含有A、U、G、C四种碱基。 【延伸探究】写出①过程碱基互补配对原则。 提示:碱基互补配对原则:U—A、A—T、C—G、G—C。 2.(2015·济宁模拟)下图是利用基因工程技术生产人胰岛素的操作过程示意图,请据图作答。 (1)图中基因工程的基本过程可以概括为“四步曲”: ? ; ; ; 。 (2)能否利用人的皮肤细胞来完成①过程? ,为什么? 。 (3)过程②必需的酶是 酶,过程③必需的酶是 酶。 (4)在利用A、B获得C的过程中,常用 切割B,使它产生 ,再加入 才可形成C。 【解析】(1)基因工程的步骤包括:提取目的基因→目的基因与运载体结合→将目的基因导入受体细胞→目的基因的检测与鉴定。 (2)图中①过程是从细胞中获取相应的mRNA,由于基因的选择性表达,人的皮肤细胞中的胰岛素基因不转录,不表达,因此不能形成胰岛素mRNA。 (3)从mRNA→DNA是逆转录的过程,需要逆转录酶。DNA分子的扩增需用解旋酶将双链DNA解旋为单链。 (4)构建基因表达载体时,必须将质粒用限制酶切割,产生一定的黏性末端,才可以在DNA连接酶的作用下与目的基因连接形成基因表达载体。 答案:(1)提取目的基因 目的基因与运载体结合 将目的基因导入受体细胞 目的基因的检测与鉴定 (2)不能 皮肤细胞中的胰岛素基因未表达(或未转录),不能形成胰岛素mRNA (3)逆转录 解旋 (4)限制性核酸内切酶 一定的黏性末端 DNA连接酶 【延伸探究】 (1)过程③除了使用解旋酶,还可以使用什么方法? 提示:高温可以使DNA双链解开螺旋。 (2)体外大量获得A的方法称为什么技术?所需的酶有什么特点? 提示:PCR技术,使用的DNA聚合酶具有耐高温的特点。 【加固训练】 1.下列关于基因工程的叙述,错误的是( ) A.目的基因和受体细胞均可来自动植物或微生物 B.限制性核酸内切酶和DNA连接酶是两类常用的工具酶 C.人胰岛素原基因在大肠杆菌中表达的胰岛素原有生物活性 D.运载体上的抗性基因有利于筛选含重组DNA的细胞 【解析】选C。因原核生物无内质网、高尔基体,不能对蛋白质进行加工和修饰,人胰岛素原基因在大肠杆菌中表达的
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