实验一植物染色体压片法重点.ppt

实验一 植物染色体压片法 一、实验目的 学习植物根尖染色体压片方法的基本技术。 熟悉细胞有丝分裂各个时期的形态特征及染色体的变化特点，为研究染色体组型等打基础。 二、实验原理 有丝分裂是体细胞分裂的主要方式，一般发生在植物根尖或茎尖的分生组织中。在有丝分裂时，细胞核与细胞质有很大的变化，但以细胞核内染色体的变化最为明显，而且是有规律地进行。 各种生物染色体在数目上和形态上是相对恒定的，并随科属种的不同而具有一定的特征。 洋葱体细胞中有8对共16条染色体，在有丝分裂过程中，每个染色体能复制一份，然后分配到两个子细胞中，所以两个子细胞与母细胞所含的染色体在数目、形态和性质上都是相同的。 在细胞遗传学研究中，人们常常需要了解某一物种的染色体数目，而最有效的方法就是观察细胞有丝分裂的中期，这样能得到较为准确的结果。 三、实验用品 （一）材料 大蒜（Aillum sativum）、洋葱（Aillum cepa、2n=16）根尖或蚕豆（Vicia faba、2n=12）根尖 （二）器材 显微镜、镊子、载玻片、盖玻片、解剖针、刀片、试剂瓶、指管（或小培养皿）、冰箱、培养箱、吸水纸。 （三）试剂 70%乙醇、45%冰醋酸、对二氯苯饱和水溶液、0.2%秋水仙素溶液、卡诺氏固定液（甲醇或95%乙醇3份，冰醋酸1份）、改良苯酚品红染色液、盐酸酒精离析液（浓盐酸：95%乙醇=1：1）、叔丁醇、二甲苯、95%乙醇、尤派胶或中性树胶。 四、实验方法和说明 （一）生根 用刀片将洋葱的老根削去露出鳞基，然后将鳞基置于盛水的小烧杯上，放在25℃培养箱内培养。待根长到2cm左右时，在上午九时切下根尖进行下一步处理。 植物细胞分裂周期的长短不尽相同，通常在十到几十小时之间，温度明显地影咱分裂周期，对于一个不太熟悉的实验材料，最好在特定温度下生根，掌握有丝分裂高峰期，以使得到更多的处于有丝分裂中期的细胞。 （二）预处理 把根尖放到对二氯苯饱和水溶液，或0.02％秋水仙素溶液中，浸泡处理3—4小时。 预处理是为了有利于对有丝分裂中染色体的观察和计数，一般在固定之前应用理化因素进行预处理，这样可以改变细胞质的粘度，抑制或破坏纺锤丝的形成，促使染色体缩短和分散等。通常是在分裂高峰前，把根尖浸泡到药剂中处理3～4小时以上。 ①低温预处理：低温处理可以引起染色体的缩短并可获得较多的中期分裂相，而且此法无须使用任何药物，安全性高。但不同的植物所需的预处理温度是有差异的，如小麦的处理温度为1～5℃，水稻和玉米则需6～8℃，剪下的根尖置于盛有蒸馏水的烧杯内，放入冰箱中低温预处理20～40h。 ②秋水仙素（colchicine）：是从百合科植物秋水仙的种子和鳞茎中提取的一种生物碱。它的分子式为C22H25NO6。纯的秋水仙素为针状结晶，一般商品秋水仙素为淡黄色粉末。熔点为155℃，味苦。易溶于冷水、酒精、氯仿和甲醛，但在热水中溶解度较低，不易溶于苯和乙醚。 秋水仙素毒性极强，可以导致眼睛暂时失明和使中枢神经系统麻痹而导致呼吸困难。在使用过程中要特别注意安全，同时要做好药品的管理工作。 一般认为秋水仙素对纺缍丝有麻痹和毒害作用，也有人认为秋水仙素通过抑制ATP的机制从而破坏纺缍丝的形成及活动。处理后的染色体收缩较直，有利于对染色体结构的研究。秋水仙素水溶液的作用效果与其浓度成正比，浓度越高，作用效果越强。通常用0.05%～0.2%的秋水仙溶液处理2～4h。 ③饱和对二氯苯（p-Dichlorobenzene）：其分子式为C6H4Cl2，无色结晶，具有特殊的臭味，常温下可升华。易溶于乙醇、乙醚、苯等有机溶剂，难溶于水，易燃而且有毒。由于对二氯苯难溶于水，所以一般用它的饱和水溶液，它的作用效果与秋水仙素相似，但价格却低得多，便于广泛使用。室温下处理3～5h，此法特别适于染色体小而多的植物，计数染色体制片效果最好。 ④8-羟基喹啉（8-Hydroxyquinolin）：其分子式为C9H7NO，为白色结晶或粉末，溶于酒精而难溶于水。8-羟基喹啉的作用机制，一般认为它首先引起细胞质粘度的改变，结果导致纺缍体的活动受阻。所用浓度范围是0.002～0.004M之间，特别适用于具有较大染色体的植物。它的优点是经它处理后，可使中期染色体在赤道面上保持其相应的排列位置，另一优点是处理后的缢痕区较为清晰。 下表为不同材料采用不同预处理方法获得的效果，供参考。 （三）固定 固定时，将根尖投入固定液中室温处理3～24小时。材料若不及时用，可经过90%酒精和70%酒精浸洗一次，再换入新的70%酒精中，置于冰箱内0～4℃保存备用。经过较长时间保存的材料，在进行观察前可用固定液再处理一次，效果较好。 通常采用的固定液是卡诺氏固定液。固定的目的是借助于物理的或化学药剂的作用，迅速透入组织和细胞将之杀死；并使其结