酶以及酶促反应.ppt

荧光素酶报告基因检测 是以荧光素(luciferin)为底物来检测萤火虫荧光素酶(firefly luciferase)。荧光素酶可以催化luciferin氧化成oxyluciferin，在luciferin氧化的过程中，会发出生物荧光(bioluminescence)。然后可以通过荧光测定仪也称化学发光仪(luminometer)或液闪测定仪测定luciferin氧化过程中释放的生物荧光。????通过荧光素和荧光素酶这一生物发光体系，可以极其灵敏、高效地检测基因的表达。通常把感兴趣的基因转录的调控元件克隆在luciferase的上游或其他适当的地方，构建成报告基因质粒。然后转染细胞，适当刺激或处理后裂解细胞，测定荧光素酶活性。通过荧光素酶活性的高低判断刺激前后或不同刺激对感兴趣的调控元件的影响。 酶联吸附免疫法 (ELISA) 原理是将特异性抗体结合到固相载体上形成固相抗体，然后和待检血清中的相应抗原结合形成免疫复合物，洗涤后再加酶标记抗体，与免疫复合物中抗原结合形成酶标抗体-抗原-固相抗体复合物，加底物显色，判断抗原含量。 辣根过氧化物酶在Western Blot检测蛋白中的应用 原理：利用特异的第一抗体与目标蛋白结合，再用辣根过氧化物酶标记的第二抗体与第一抗体相结合，加以底物显色来反映检测蛋白的强度。 2．酶标记测定法 酶可以代替同位素与某些物质相结合，从而使该物质被酶所标记。通过测定酶的活性来判断被标记物质或与其定量结合的物质的存在和含量。 3．工具酶 除上述酶偶联测定法外，人们利用酶具有高度特异性的特点，将酶做为工具，在分子水平上对某些生物大分子进行定向的分割与连接。 （二）酶作为药物用于临床治疗 （三）酶的分子工程 1．固定化酶 (immobilized enzyme) 将水溶性酶经物理或化学方法处理后，成为不溶于水但仍具有酶活性的一种酶的衍生物。 固定化酶在催化反应中以固相状态作用于底物，并保持酶的活性。 2．抗体酶 3．模拟酶 具有催化功能的抗体分子称为抗体酶(abzyme) 。 模拟酶是根据酶的作用原理，利用有机化学合成方法，人工合成的具有底物结合部位和催化部位的非蛋白质有机化合物。 本节要点 了解酶与医学的联系 * 酶的磷酸化与脱磷酸化 -OH Thr Ser Tyr 酶蛋白 H2O Pi 磷蛋白磷酸酶 ATP ADP 蛋白激酶 Thr Ser Tyr -O-PO32- 酶蛋白 二、 酶含量的调节 （一）酶蛋白合成的诱导和阻遏 1.诱导作用(induction):某些化合物可在转录水平上促进酶蛋白合成,此作用称为诱导作用,此化合物称为诱导剂(inducer)。 2.阻遏作用(repression):在转录水平减少酶蛋白合成的物质称为辅阻遏剂(corepressor),辅阻遏剂与阻遏蛋白结合,可影响基因的转录,此作用称为阻遏作用。 （二）酶降解的调控 本节要点 酶原激活的原理 变构调节 共价修饰调节 酶含量的调节 第五节  酶的命名与分类The Naming and Classification of Enzyme 一、酶的命名 1. 习惯命名法——推荐名称 2. 系统命名法——系统名称 一些酶的命名举例 二、酶的分类 1.氧化还原酶类(oxidoreductases) 2.转移酶类 (transferases ) 3.水解酶类 (hydrolases) 4.裂解酶类 (lyases) 5.异构酶类( isomerases) 6.合成酶类 (ligases, synthetases) 本节要点 酶有哪六大类 第六节酶与医学的关系The Relation of Enzyme and Medicine （一） 酶与疾病的发生 （二） 酶与疾病的诊断 （三） 酶与疾病的治疗 一、酶与疾病的关系 酶与疾病的发生 大多数疾病的发生都与体内酶的活性发生变化有关. 与酶有关的疾病举例 蛋白质变异 （分子病）病症 --------------------------------------------------------------- 珠蛋白 珠蛋白生成障碍性贫血 酶变异 （先天性代谢缺陷）　 已糖激酶 已糖激酶缺乏型溶血性贫血半乳糖-1-磷酸尿苷转移酶 半乳糖血症酪氨酸酶 白化病磷酸化酶激酶