2015年高二生物人教版选修一课件：2.2土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 .pptVIP

　　1.某同学在稀释倍数为106的培养基中测得平板上菌落数的平均数为234，那么每克样品中的菌落数是（涂布平板时所用稀释液的体积为0.1ml）( )　　A. 2.34×108　　B. 2.34×109　　C. 234　　D. 23.4 练一练 　　1.某同学在稀释倍数为106的培养基中测得平板上菌落数的平均数为234，那么每克样品中的菌落数是（涂布平板时所用稀释液的体积为0.1ml）( )　　A. 2.34×108　　B. 2.34×109　　C. 234　　D. 23.4 练一练 √ 　　2.用稀释涂布平板法来统计样品中活菌的数目，其结果与实际值相比　　　　　　　　　　　　（　　 ）　　A.比实际值高　　B.比实际值低　　C.和实际值一致　　D.比实际值可能高也可能低 下列能选择出分解尿素的细菌的培养基是 A. KH2PO4、NA2HPO4、MgSO4.7H2O、　葡萄糖、尿素、琼脂、水 B. KH2PO4、NA2HPO4、MgSO4.7H2O、　葡萄糖、琼脂、水 C. KH2PO4、NA2HPO4、MgSO4.7H2O、　尿素、琼脂、水 D. KH2PO4、NA2HPO4、MgSO4.7H2O、　牛肉膏、蛋白胨、琼脂、水 练一练 √ 专题2 微生物的培养与应用 湖南邵东三中 杨连进 2.2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 两个主要目的： 　　(1)从土壤中分离出能够分解尿素的细菌； 　　(2)统计每克土壤样品中究竟含有多少这样的细菌。 水生耐热细菌Taq ( Thermus aquaticus ) 耐高温的Taq DNA聚合酶 美国微生物学科布鲁克（T.Brock) 1966年发现耐热细菌 研究思路 （一）筛选菌株 尿素分子的立体结构 CO(NH2)2+H2O 脲 酶 分解尿素的细菌: CO2+2NH3 培养基配方 KH2PO4 1.4g Na2HPO4 2.1g MgSO4·7H2O 0.2g 葡萄糖 10.0g 尿素 1.0g 琼脂 15.0g 将上述物质溶解后，用蒸馏水定容至1000mL 　　在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基。 选择培养基 1．直接计数法： 　　最常用显微镜直接计数法。 　　先将待测样品制成悬液，然后取一定量的悬液放在显微镜下进行计数。根据在显微镜下观察到的微生物数目来计算出单位体积内的微生物总数。 测定微生物数量的方法： 背景知识 优点：　　设备简单、能观察微生物的形态特征。 缺点：　　难以计数微小量多的细菌。　　 一般用于纯培养悬浮液中各种单细胞菌体的计数。 2．间接计数法： 　　最常用稀释平板计数法。 （二）统计菌落数目 统计菌落数目的理论依据： 　　当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。因此，恰当的稀释度是成功地统计菌落数目的关键。为了保证结果准确，通常将几个稀释度下的菌液都涂布在平板上，培养后再选择菌落数在30～300的平板进行计数。 每克样品中的菌株数 = (C÷V)×M C：某一稀释度下平板上生长的平均 菌落数 V：涂布平板时所用的稀释液的体积 (ml) M：稀释倍数 　　统计的菌落往往比活菌的实际数目低。这是因为当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落。因此结果一般用菌落数而不是活菌数来表示。 注意： 　　 两位同学用稀释涂布平板法测定同一土壤样品中的细菌数。在对应稀释倍数为106的培养基中，得到以下两种统计结果。 　　1.第一位同学在该浓度下涂布了一个平板，统计的菌落数为230。 　　2.第二位同学在该深度下涂布了三个平板，统计的菌落数分别为21、212和256，该同学以这三个平板菌落数的平均值163作为统计结果。 实例1 　　你认为哪位同学的结果更接近真实值？这两位同学的实验需要改进吗？如果需要，如何改进？ 　　第一位同学只涂布了一个平板，没有设置重复组，因此结果不具有说服力。第二位同学考虑到设置重复组的问题，涂布了3个平板，但是，其中1个平板的计数结果与另2个相差太远，说明在操作过程中可能出现了错误，因此，不能简单地将3个平板的计数值用来求平均值。 ? 因此，这两位同学的实验需要改进，在设计实验时，一定要涂布至少3个平板，作为重复组，才能增强实验的说服力与准确性。在分析实验结果时，一定要考虑所设置的重复组的结果是否一致，结果不一致，意味着操作有误，需要重新实验。 说明设置重复组的重要性。 　　在做本课题的实验时，A同学从对应106倍稀释的培养基中筛选出大约150个菌落。但是，其它同学在同样的稀释度下只选择出大约