植物细胞实验参考答案.docVIP

2010-2011年第二学期植物细胞工程实验（本科）试题 1.实验室器具洗涤的工艺流程是什么？洗净的判定标准是什么？ 工艺流程：浸泡—刷—冲洗—刷洗—干燥—存放 判定标准：净水反复冲洗至管壁、瓶壁形成均匀水膜而无水珠成股流下 2.无菌室及培养室的日常维护方法。 维护方法：1、启用时清扫擦拭无尘 2、定期、不定期给予紫外线照射，来苏儿拖地，84消毒液喷雾，氧乙酸消毒等。 3.外植体消毒的一般程序（菊花、银杏、马铃薯三选一）。 消毒程序：1、菊花：幼苗-摘掉叶片--流水冲洗10-30min--75%酒精泡30s(倒入废液桶)--0.1%升汞Hgcl2泡10min（倒入升汞回收瓶）--无菌水洗三至五遍即可 2、银杏：种子--剥去壳质中种皮--75%酒精泡30s(倒入废液桶)-- 0.1%升汞Hgcl2泡10min（倒入升汞回收瓶）--无菌水洗三至五遍即可 3、马铃薯：芽-流水冲洗10-30min--75%酒精泡30s(倒入废液桶)-- 0.1%升汞Hgcl2泡10min（倒入升汞回收瓶）--无菌水洗三至五遍即可 4. 简述无菌操作的技术要点。 要点：1、组培室消毒处理2、超净工作台开紫外灯照射10-20min送风3、严格消毒外植体4、已消毒的外植体接触的所以工具，器血，包括空气均须是无菌的。 5. 简述高压灭菌锅的使用方法。 方法：1、开盖：向左旋转移动手轮数圈，直至移动到顶，使锅盖充分提起，拉起左力住上的保险栓，侧向推开横梁 2、通电：插好插头，将控制面板上的电源开关按至ON处 3、加水：加入约8升水直至高水位亮，如果加水过多溢出内胆，应开启下阀防区内胆中的水 4、堆放：各包之间应留有一定的间隙，勿将灭菌包堵住安全阀气放孔 5、密闭：使锅盖与国体充分密合，绿灯亮时。表示容器密闭到位 6、灭菌：控制面板上的加热灯亮，待指针指向0.05MP时打开排气阀让少量蒸汽排除，待排尽后关闭排气阀，可以达到灭菌室温度均衡的目的 7、排气：灭菌完成，关闭电源开关，拔掉插头，待压力表指示为零后，开启安全阀，放尽气体 8、起盖（如果熟练使用方法，请读者自己概括） 6. 简述污染率、枯死率和诱导率的计算方法。 计算方法：污染率=100%污染数/总接种数 枯死率=100%未丛生芽的/未污染的 萌芽率=100%有丛生芽的/未污染的 7. 请写出MS基本培养基的母液MSⅠ的配置步骤。 MSI：（大量元素5种，20倍浓缩，取1L） 大量元素20倍浓缩 使用浓度mg/L 称量 NH4NO3 33,000 33 KNO3 38,000 38 Cacl2.2H2O 8,800 8.8 MgSO4.7H2O 7,400 7.4 KH2PO4 3,400 3.4 8. 银杏愈伤组织提取黄酮的操作要点。 操作要点： 取出愈伤组织——65℃烘干48h,磨成细粉——称取0.5g细粉——加入20ml甲醇提取黄酮——超声波水浴破碎30min——过滤，收集滤液加入10ml,1.5mol/L的HCL水浴回流30min(最佳)——甲醇定容至50ml——于366nm下测OD值（OD之在0.2—0.8间有效） 9.菊花快繁实验中，在进行生根培养时，为什么要选择1/2MS作为基本培养基？ 原因：选择1/2MS作为基本培养基,即降低了无机盐的含量，降低了渗透压，有利于牙系充培养基中吸水，促进根的生长. 10.简述植物细胞工程实验室里马铃薯脱毒的方法及原理。 方法：选择品种和母株——获取茎段——芽段消毒——剥离茎尖接种——分化成苗——保存无毒试管苗——扩繁或试管薯诱导——原种——生产种 原理：由于病毒在植株体内分布不均匀，存在于根尖、茎尖部分病毒含量低，或无病毒，以茎尖组织作为外植体，能获得脱毒植株，供繁种，生产使用。 11.简述配方1/2MS+NAA0.1+蔗糖3%+琼脂0.7%，pH5.8的含义及配1L的制备方法。 含义：1/2MS：降低了无机盐的含量，降低了渗透压，有利于牙系充培养基中吸水促进根的生长 NAA0.1 ：即BA/NAA=Ni=0, 根据植物生长激素 CTK/AUK 生长调控理论，Ni值越小，越有利于根的生长. 配置方法：1、洁净的色搪瓷杯，取蒸馏水70