基因诊断与治疗教材.ppt

基因治疗关键步骤之一，是将治疗基因高效转移入患者体内、并能调控其适度表达。 常用的载体有两类：病毒载体和非病毒载体。 病毒载体：逆转录病毒载体， 腺病毒载体， 腺相关病毒载体等； 非病毒载体：与病毒载体的主要区别在于－－采用理化方法将治疗基因转移入患者体内。 （二）载体的选择与构建 (三) 靶细胞的选择 生殖细胞: 禁止 体细胞： 淋巴细胞、造血细胞、 内皮细胞、肌肉细胞、 肝细胞、成纤维细胞 肿瘤细胞等 可根据疾病的特点、目的基因及其转移的方式等因素来确定。 选择的原则： (1) 便于从体内取出和回输； (2) 便于在体外培养与增殖； (3) 便于基因的高效转移； (3) 能够持续表达目的基因。 Vector DNA Helper DNA Engineering a Virus into a Vector wildtype virus Viral vector replication proteins structural proteins Packaging Therapeutic gene essential viral genes Packaging cell Y vector Vector uncoating Therapeutic mRNA and protein Episomal vector Integrated expression cassette Target cell Gene Transfer 治疗基因 导入受体细 胞的方法 化学方法 物理方法 膜融合法 病毒载体法 质粒DNA直接转移法 磷酸钙法 DEAE－葡聚糖法 电穿孔法 粒子轰击法（基因枪法） （四）基因转移方法 标记基因技术 基因缺陷型受体细胞技术 基因共转染技术 分子杂交技术 外源基因表达鉴定 ( 五 ) 转导细胞的选择鉴定 ( 六 ) 回输体内 将治疗性基因修饰的细胞以不同方式回输体内。 基因治疗的应用 遗传病： 替补法，导入正常基因 病毒性疾病： 阻断病毒基因在体内的转录和翻译 肿瘤： 基因的补充和修复，免疫疗法，细胞毒基因疗法 1990 美国医学家W·F·安德森等人对腺甘脱氨酶缺乏症（ADA缺乏症）的基因治疗，是世界上第一个基因治疗成功的范例。 腺苷脱氨酶(ADA)缺乏的严重联合免疫缺陷(SCID) 病因: 淋巴细胞缺乏ADA酶 腺苷、dATP堆积 破坏免疫功能 患儿很少活到成年 第一个基因临床治疗的方案(1990.9.14,NIH) 治疗策略： 淋巴细胞ADA酶 恢复至正常水平的 5%-10% 维持免疫系统功能 改善病人症状 Ashanti de Silva. Ashanti was the first patient to be treated with gene therapy. She received infusions of T cells that had been transduced with a gene for ADA 中国的基因治疗 1991.12~1995.6, 　B型血友病 逆转录病毒，因子IX，二兄弟 凝血因子IX在体内持续表达16个月以上，血浆凝血因子IX水平增高1 ~ 3倍，临床症状有所改善。 复旦大学与长海医院 薛京伦 (复旦大学) 问 题 三个关键问题： 构建高效、靶向性基因转移系统 发现切实有效的治疗基因 外源基因表达的调控 一个需要重视的问题： 外源基因的导入对机体带来的不利影响 现状及展望 基因治疗现阶段仅仅是实验性地运用于经过其他治疗无效的“绝症”； 酶及药物性的化学疗法，以及骨髓、器官移植仍然是当前治疗多种遗传病的最有效手段； 癌症的治疗仍以手术切除及化疗为主。 Thanks a lot * Human stem cells may provide a valuable source of cells to engineer. 体外法基因治疗需要从患者体内取出细胞，并以治疗基因修饰，回输表达治疗基国的修饰细胞于患者； 体