蛋白质组学基本原理解说.ppt

三、蛋白质的分离与二维电泳技术 (一) 二维电泳的基本原理 根据蛋白质的两个一级属性等电点和相对分子量的特异性，将蛋白质混合物在第一方向按等电点高低进行等电聚焦分离（IEF），在第二方向按照分子量大小进行SDS分离（十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳）。 1D-SDS一 原理 在1D-SDS中，蛋白质样品溶解在通常含有巯基还原剂（巯基乙醇或DDT)和SDS的上样缓冲液中。 SDS与蛋白质结合，以与分子质量约恒定的比例将负电荷（来自SDS硫酸基团）传递给蛋白质。高电压下，蛋白质- SDS复合物在交联的聚丙烯酰胺凝胶上迁移，其速度取决于它们穿越凝胶孔基质的能力。蛋白质按照分子质量次序分离形成条带。 二 1D-SDS的局限性 用1D-SDS得到的分离度是相当有限的，显示 含有单一蛋白质的条带实际上可能含有多种蛋白质分子。 2D-SDS一 两种分离方法的结合 1）根据等电点用IEF分离蛋白质； 2）在聚丙烯酰胺凝胶上电泳进一步分离聚焦的 蛋白质。 2D-SDS在第一向电泳根据等电点的不同， 第二向电泳根据分子质量的不同分离蛋白质。 二 新式2D-SDS新系统使用固相PH梯度（IPG)胶条和相对简单的硬件，能很容易的从IPG胶条将蛋白质转移到SDS平板凝胶中。在固相PH梯度中，聚羧