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实 验 五 病原性球菌 实验目的： 熟悉几种常见病原性球菌的形态染色特点。 掌握血浆凝固酶试验的原理、方法、意义。 掌握抗“0”试验的原理、方法及临床意义。 一、常见病原性球菌形态染色的观察（示教） （细菌的形态；革兰染色性；排列方式） 二、血浆凝固酶试验（示教) 三、抗“0”试验(操作) 球菌革兰染色标本片 葡萄球菌培养物、兔血浆、生理盐水、载玻片、接种环、酒精灯、火柴、蜡笔 待测病人血清、抗“O”试剂（溶血素“O”、ASO胶乳）、反应板、搅拌棒 血浆凝固酶实验注意事项 血浆多挑几环（一滴的量）；菌落不能太多。 要做阴性对照，有一部分葡萄球菌有自凝现象。 最好用抗凝的兔血浆 ，兔血浆凝块结实，凝固速度快 ；兔血浆应放4℃冰箱保存。 意义：血浆凝固酶试验是鉴别葡萄球菌有无致病性的重要指标，致病性葡萄球菌为阳性。 抗“O”试验 操作步骤： 1.在反应板上标记好反应区域； 2.分别在相应区域加：阴性对照1滴，待测血清一滴； 3.再各加一滴溶血素“O”，轻轻摇动1min，使其充分混匀。 4.再滴加ASO胶乳试剂1滴于每格内，轻摇3min，观察结果 。 抗“O”试验 结果： 阴性对照无凝集； 待测血清 凝集出现 ASO200IU/ml 阳性 无凝集出现 ASO200IU/ml 阴性 注意事项： 1.试剂使用前先预置达室温，且要摇匀。 2.加试剂时，要保证液滴大小一致。 3.试剂盒贮存于2-10℃，切勿冰冻。 抗“O”试验意义 1.抗体滴度 ＞200IU/ml以上，新近有可能反复感染过乙型溶血型链球菌 2.作为风湿活动期、风湿性关节炎、风心病、急性肾小球肾炎的辅助诊断。 思考题 临床协助风湿热诊断常采用试验 ，活动性风湿热患者血清中该抗体一般超过 。 鉴定葡萄球菌有无致病性的重要指标是 。 作业 二、血浆凝固酶实验 血浆 纤维蛋白原 纤维蛋白 血浆凝固酶 附着于细菌表面 玻片上形成凝块（结合型） 试管中血浆发生凝固（游离型） 致病性葡萄球菌 原理 （1）取洁净玻片一张，玻片分为左右两区并做好标记，于一端加生理盐水一滴，另一端加兔血浆一滴。 （2）用接种环取金黄色葡萄球菌苔一环，在玻片一端生理盐水中研磨混匀，接种环灭菌后再取金黄色葡萄球菌苔一环，在另一端兔血浆中研磨均匀。 （3）立即观察结果。 血浆凝固酶实验方法（玻片法） 结果：细菌在生理盐水无凝集而在血浆中聚集成团块或无法混匀，为血浆凝固酶试验阳性 链球菌溶血素 链球菌溶血素O（SLO） 链球菌溶血素S（SLS） 抗原性强，产生抗O抗体，该抗体在感染链球菌2-3周 至病后1年内可检出； 正常参考值：成人200 U 风湿热患者抗O抗体250单位以上（高于正常人）， 活动期在400单位以上； 抗O试验常用于链球菌新近感染或风湿热的辅助诊断 氧敏感 氧稳定 三、抗链球菌溶血素“O”试验 （抗“O”试验，ASO） 　　抗链球菌溶血素“O”（ASO） 胶乳凝集法 高滴度病人血清被适量溶血素中和了正常水平 的抗体后，还有多余ASO(抗O抗体)，这些多余抗体即与ASO胶乳试剂(溶血素“O”与聚苯乙烯胶乳共价交联的产物)反应，出现清晰、均匀的凝集颗粒。 原理： 阴性对照 待测血清 各加溶血素“O” 1滴轻摇1min 再加ASO胶乳1滴轻摇3min 观察结果 方法： 抗“O”抗体 溶血素“0” ASO胶乳 * * 课程名称：病原生物学与免疫学 班级：14级专科临床 学时：2 学年：2014-2015 学期：2 课时安排： 一、导入新课、讲述新课25 ′ 二、学生操作 48′ 三、总结本次实验主要内容，提出学生在实验中存在的问题及改进措施。 5′ 四、布置作业 2′ 教法设计： 讲授、提问、演示、操作 教学用具： 多媒体设备、实验用品 实验前准备好各种实验用物，准备好示教用品。