8-1微生物遗传.pptVIP

第三节 基因突变的规律及类型 营养缺陷型 抗性突变型 条件致死突变型 形态突变型 抗原突变型 产量突变型 第四节 基因突变的机制 用途：广泛用于检测环境和食品中是否存在化学致癌物。 特点：快速、准确、费用廉价 三、DNA损伤的修复 除了DNA聚合酶进行校正外，还通过几种不同的机制进行DNA的修复： (1) 光复活作用 (2) 切除修复 (3) 重组修复 (4) SOS修复 (4) SOS修复 这是在DNA分子受到较大范围的重大损伤时诱导产生的一种应急反应。涉及几个基因：recA、lexA、uvrA、uvrB、uvrC的共同作用。 此外，经紫外线照射的大肠杆菌还可能诱导产生一种称为错误倾向（error-prone）的DNA聚合酶，催化空缺部位的DNA修复合成，但由于它们识别碱基的精确度低，所以容易造成复制的差错，这是一种以提高突变率来换取生命存活的修复，又称错误倾向的SOS修复。 第五节 微生物的诱变育种(自学） 二、几种重要突变株的筛选方法 1. 抗性突变株的筛选 (1) 抗终代谢物结构类似物突变株的筛选 (2) 抗药性突变株筛选 2. 营养缺陷型的筛选 1. 抗性突变株的筛选 （1）抗终代谢物结构类似物的突变株 用途：筛选相应代谢物的高产菌株 （2）抗药性突变株 用途：筛选相应药物(抗生素) 的高产菌株或遗传标记制作 筛选的方法: a. 高于临界浓度的平板进行分离； b. 梯度平板法 a. 不含维生素的酪素水解液或氨基酸混合液 b. 维生素混合液 c. 0.1%碱水解酵母核酸液 （3）营养缺陷型的用途 生产菌 (氨基酸、核苷酸、维生素等高产菌需求)； 研究代谢途径和杂交、转化等遗传规律的遗传标记。 诱变育种的程序：实验讲义 出发菌株（纯化） 前培养（ CM ，培养至对数期） 菌悬液制备 活菌计数 诱变预备实验（剂量存活率曲线） 诱变处理（相对杀菌率为70-75%，30-70%） 活菌计数 中间培养（CM，培养过夜，克服表型延迟） 突变株分离 初筛 复筛 生产性能试验 菌种（鉴定与）保藏 1. 从生产中选育 2. 定向培育优良品种 一般指用特定因素长期处理微生物群体，同时不断地对它们进行移种传代，以达到积累并选择相应的自发突变株的目的。 例：卡介苗（牛型结核分枝杆菌的减毒活菌苗） Ames试验 斑点试验和平板掺入试验 紫外线诱变时必须在暗室、红光下进行 （1）光复活作用（photoreactivation） 可见光可大大降低经紫外线照射后微生物死亡率的现象。 机理： 经UV照射后带有嘧啶二聚体的DNA分子，在黑暗中会和一种光激活酶——光解酶结合，形成酶‐DNA复合物，该复合物暴露在可见光下时，光解酶会因获得光能而被激活，并使二聚体重新分解成单体，光解酶也从复合物中释放出来，再结合到其它二聚体上。 这种修复机制不是移去和取代核苷酸，而是胸腺嘧啶二聚体直接被修复，所以是一种无错误的修复。 （2）切除修复（excision repair，又称暗修复） 一种普遍的修复系统。能移去胸腺嘧啶二聚体和修复大多数引起的DNA扭曲损伤。该修复系统不需要可见光，通过酶切作用移去损伤的碱基（包括损伤位点附近的一些碱基），随后合成一段正常DNA链。 内切核酸酶 4种酶参与 外切核酸酶 DNA聚合酶 DNA连接酶 （3）重组修复