遗传标记基因图谱预案.pptVIP

第二节 基因图谱 第二节 基因图谱 遗传图谱的理论依据 （1）基因在染色体上是呈直线排列的； （2）非等位基因在染色体上排列的直线距离与基因间的重组频率呈正相关。 遗传连锁图谱的构建步骤 （1）选用合适的分子标记 （2）选择用于建立作图群体的亲本组合 （3）建立作图分离群体 （4）测定作图群体中不同个体或者株系的标记基因型 （5）对标记基因型数据进行连锁分析，构建标记连锁图 （5）对标记基因型数据进行连锁分析，构建标记连锁图 设计大量的已知连锁基因个体的杂交试验； 获得的F1再同纯隐性个体测交计算重组频率； 以重组频率的1%作为1个摩尔根单位（即1cM）将基因定位在一条直线上。 例2：在例1中的F1测交后代出现6种表型后代，而在有些连锁基因的三点测交中会出现8种后代。如ec（棘眼）、ct（截翅）、cv（翅上横脉缺失）3个基因也位于X染色体上。具体的杂交、测交试验如下： F1 ecct+/++cv × ecctcv/Y F2 表型 个体数 ecct+ 2125 ++cv 2207 ec+cv 273 +ct+ 265 ec++ 217 +ctcv 223 +++ 5 ecctcv 3 总数 5318 荧光原位杂交法 荧光原位杂交技术（fluorescence in situ hybridization, FISH）的基本原理是将DNA（或RNA）探针用特殊的核苷酸分子（如biotin-dUTP或digoxigenin-dUTP)标记，然后将探针直接杂交到染色体或DNA纤维切片上，再用与荧光素分子偶联的单克隆抗体与探针分子特异性结合来检测DNA序列在染色体或DNA纤维切片上的定位方法。 FISH技术的发展 多彩色荧光原位杂交技术 用不同的修饰核苷酸分子标记不同的DNA探针，再用不同的荧光素分子检测不同的探针分子，因此，可以在荧光显微镜下在同一张切片上同时观察几种DNA探针的定位，直接得到他们的相关位置和顺序。 FISH技术的发展 （1）在中期染色体上的荧光原位杂交 （2）在减数分裂粗线期染色体上的荧光原位杂交 （3）在间期细胞核上的荧光原位杂交 （4）在游离染色质上的荧光原位杂交 （5）在DNA纤维上的荧光原位杂交 AFLP技术基本原理 基因组DNA经限制性内切酶双酶切后，形成分子量大小不等的随机限制性片段 将特定双链接头连接在这些DNA片段的两端，形成一个带接头的特异片段，作为DNA扩增的模板 接头序列以及与其相连的限制位点作为随后进行的限制片段扩增的引物结合位点 PCR引物3’末端含有选择核苷酸，选择核苷酸延伸到酶切片段区，这样就只有那些两端序列能与选择核苷酸配对的限制性酶切片段被扩增 扩增片段通过变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分离检测。 * * 遗传图谱 物理图谱 转录图 序列图 遗传图谱：又称连锁图谱。指人类基因组内基因以及专一的多态性DNA 标记位置的图谱。表示同一条染色体的任意两点的相对