植物细胞工程第一章实验室设备介绍.ppt

第一章 实验设备 思考题 1、一个正规的组织培养实验室应具备那些房间？ 2、组织培养常用的设备有哪些？各有何用途？ 3、组织培养的环境条件有哪些？ 　　培养皿 　　罐头瓶 七、玻璃器皿的清洗 　　对玻璃器皿清洗的目的是防止带入有毒或影响培养效果的化学物质或微生物等，通常对组织培养所需的玻璃器皿的清洁程度要求非常严格。 　　常用的洗涤剂有肥皂、洗洁精、洗衣粉和铬酸洗液。 　　新购的玻璃器皿或多或少的含有游离的碱性物质，先用1%稀盐酸浸泡一夜，后用肥皂水洗净，清水冲洗，蒸馏水冲淋，干后备用。 　　已用的玻璃器皿应先清水洗净残渣，再用热的肥皂水或洗洁精洗净，较脏的器皿可浸泡在洗涤剂中一段时间（视器皿的肮脏程度而定），然后清水、蒸馏水冲洗，烘干备用。 　　已被霉菌等杂菌污染的玻璃器皿必须在121℃高压蒸汽灭菌30min后，趁热倒去残渣，用洗涤剂清洗，浸泡在浓的重铬酸钾洗液中，2h后取出，再用清水、蒸馏水冲洗。切忌直接用水冲洗，否则会造成培养环境的污染。 　　用过的吸管或滴管应放在洗涤液中浸泡2h以上，取出经流水冲洗1/2h后，蒸馏水冲洗。 　　玻璃器皿清洗干净的标准：玻璃器皿应透明发亮、内外壁水膜均匀，不挂水珠。 第三节 培养条件 在植物组织培养中温度、光照、湿度等各种环境条件，培养基组成、ＰＨ值、渗透压等各种化学环境条件都会影响组培苗的生长和发育。 不同培养目标采用的培养温度也不同，百合鳞片在30℃下再生的小鳞茎的发叶速度和百分率都比在25℃下的高。 桃胚在2～5℃条件进行一定时间的低温处理， 有利于提高胚培养成活率。用35℃处理草莓的茎尖分生组织3～5天，可得到无病毒苗。 一、温度 温度是组织培养过程中的重要因素。 组织培养在最适温度下生长分化表现良好， 大多数组织培养都是在23～27℃之间进行，很多研究者采用了25±２℃的恒温条件。低于15℃时培养，组织会表现生长停止，高于35℃时对生长不利。 不同植物培养的适温不同。百合的最适温度是20℃、月季是25～27℃、番茄是28℃。 温度不仅影响组培苗的生长速度， 也影响其分化增殖以及器官建成等发育进程。如烟草芽的形成28℃为最好， 在12℃以下，33℃以上形成率皆最低。 二、光照 组织培养中光照也是重要的条件之一。 1．光照强度 从目前的研究情况看，光照强度对外植体、细胞的最初分裂增殖和器官的分化有重要影响。 一般来说，光照强度较强，幼苗生长的粗壮，而光照强度较弱幼苗容易徒长。 2．光质 光质对愈伤组织诱导、培养组织的增殖以及器官的分化都有明显的影响。 如百合珠芽在红光下培养，８周后，分化出愈伤组织。但在蓝光下， 几周后才出现愈伤组织，而唐菖蒲子球块接种15天后，在蓝光下培养首先出现芽，形成的幼苗生长旺盛，而白光下幼苗纤细。 3．光周期 试管苗培养时要选用一定的光暗周期来进行组织培养， 最常用的周期是16小时的光照， ８小时的黑暗，研究表明，对短日照敏感的品种的器官组织， 在短日照下易分化，而在长日照下产生愈伤组织，有时需要暗培养， 尤其是一些植物的愈伤组织在暗下比在光下更好。如红花、乌桕树的愈伤组织。 * * 第一节 实验室设计 一个标准的组织培养实验室应当包括洗涤室、配置室、接种室、培养室等。在实际中可结合可行条件，合并一部分。 一、洗涤室 洗涤室完成玻璃器皿和其它仪器的清洗、干燥和贮存。室内应配备大型水槽，用于培养器皿的洗涤，最好是内衬白瓷砖的水泥槽。为防止碰坏玻璃器皿，可铺橡胶板，上下水道要畅通。备有大型塑料筐，用于放置培养器皿。可直接置于搁架上，以节约空间和便于运输工作。备有空干架，以空干涮净的培养器皿。 二、配置室 配置室要求明亮、通风。 在配置室内要完成培养基的配制、分装、包扎和高压灭菌等工作，以及试管苗出瓶、清洗与整理工作。 为完成培养基的制备工作，配置室应配备以下仪器设备： 1．大型工作台 其高度应方便配制工作。 2．药品柜 用以放置常用药品。 3．普通冰箱 主要用于贮存母液、各种易变质、易分解的化 学药品以及植物材料等。 4．电子分析天平和托盘天平 电子分析天平精确度为0.001g，用于称取大量元素、微量元素、维生素、激素等微量药品；托盘天平精确度为0.1g，用于称取用量较大的糖和琼脂等。天平应放置在干燥、不受振动的固定操作台上。 5．蒸馏水器 蒸馏水用于配制母