实验四-酶联免疫吸附试验-ELISA讲述.pptVIP

实验四 阻断酶联免疫吸附试验（阻断ELISA) 免疫标记技术 定义： 将抗原-抗体反应与标记技术相结合，用放射性同位素、酶或荧光素标记的已知抗体或抗原，通过检测标记物，间接测定未知的抗原或抗体。 分类： 放射免疫测定法：131I，32P 免疫荧光技术：FITC，PE 免疫酶测定法：HRP，AP 免疫酶测定法(Enzyme ImmunoAssay,EIA) 用酶标记的抗原或抗体进行的抗原抗体反应。 辣根过氧化物酶(HRP)，碱性磷酸酶(AP) 特点： 高度特异性：保持抗原抗体反应的特异性 高灵敏度：酶催化底物显色的高效性，pg水平微量检测 定性定量检测：反应液颜色深浅或光密度值 分类： 酶联免疫吸附试验：可溶性抗原或抗体 酶免疫组化法： 组织中或细胞表面的抗原。 酶联免疫吸附试验(Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay, ELISA) （1）利用抗原与抗体的特异反应将待测物与酶连接。 （2）通过酶与底物产生颜色反应，用于定量测定。 测定的对象可以是抗体也可以是抗原。 直接法（direct ELISA）： 将已知抗原直接吸附于载体，加酶标抗体 检测抗体 间接法（Indirect ELISA）： 将已知抗原吸附于固相载体，加酶标记二抗 检测液相中未知抗体 双抗体夹心法（Sandwich ELISA)： 将已知抗体吸附于固相载体，酶标记一