动物细胞工程讲课概述.ppt

动物细胞工程 思考与回忆： 1、动物细胞全能性特点？ 随着细胞分化程度的提高而逐渐受到限制，分化潜能变窄。细胞核仍具有全能性。 2、能否用植物组织培养的方法使动物细胞发育成动物个体？ 不能。动物细胞和组织在体外培养的过程中，伴随一定的组织分化，不管采用什么手段和培养条件，由于细胞的运动、变化，细胞发生结构功能变异，结果长时间的培养只能使单一类型的细胞保存下来，最终成了简单的细胞培养。 3、动物的细胞培养的理论依据（原理）？ 细胞增殖 定义： 贴满瓶壁的细胞需要重新用胰蛋白酶等处理，然后分瓶继续培养，让细胞继续增殖。这样的培养过程被称为传代培养.（分瓶培养的过程） 液体合成培养基：（糖、氨基酸）、促生长因子、（水、无机盐、微量元素）等；通常还需加入血浆、血清等天然成分。 6、植物组织培养和动物细胞培养的比较： 1、定义：指用自然或人工方法使两个或多个不同的细胞融合成一个细胞的过程。 生物法：灭活的病毒诱导融合.(利用灭活仙台病毒是动物细胞融合所特有的。 这是由于病毒的磷脂外衣与动物细胞的膜十分相似的缘故。病毒外壳上的某些糖蛋白可能还有促进细胞融合的功能。) 动物细胞融合 人们获得抗体的传统方法是? 将抗原注入动物体,然后从动物血清中提取抗体 这种方法的缺点是什么? 效率低，产量有限，纯度低，动物抗体注入人体可能产生严重的过敏反应。 运用已学知识，设想怎样获得单一类型的抗体？ 能否用单个B淋巴细胞通过克隆形成的细胞群来产生单一类型的抗体呢？ B淋巴细胞在体外不能无限增殖。 单克隆抗体的制备—极富创造性的方案 将能够产生特定抗体的B淋巴细胞和具有无限增殖能力的骨髓瘤细胞融合在一起，形成杂交瘤细胞。杂交瘤细胞既能在体外快速生长，又能持续分泌成分单一的特异性抗体。这种单一类型的只针对某一特定抗原决定簇的抗体分子，就是单克隆抗体。 米尔斯坦(阿根廷)和科勒(德国)因此在1984年获诺贝尔奖。 动物特异性免疫 分离B淋巴细胞（B）；找到骨髓瘤细胞（G）。注意B淋巴细胞是一个系列。（B1,B2,B3,---Bn） 细胞融合——三种融合方式:（BB;BG;GG） 第一次筛选：在“选择培养基培养”上培养筛选杂交瘤细胞（只有BG杂交瘤细胞存活。但BG杂交瘤细胞也是一个系列：如B1G,B2G---BnG。而BB,GG在此培养基上不能存活。） 第二次筛选：在“多孔培养板上”培养杂交瘤细胞系列 ，每孔只放一个杂交瘤细胞。“克隆化培养”每个杂交瘤细胞，并进行“单一抗体检测”，“检测阳性”的孔内即是所需要的杂交瘤细胞。 选择所需要的杂交瘤克隆细胞群，体外培养或注射到小鼠腹腔内增殖。 提取单克隆抗体。 （2）用于治疗疾病和运载药物： 主要用于癌症治疗，可制成“生物导弹” 生物导弹：抗癌细胞的单克隆抗体+放射性同位素或化学药物或细胞毒素。（单克隆抗体：导向。准确找到癌细胞位置，原位杀死癌细胞。） 8、单克隆抗体的特点： 9、骨髓瘤细胞是癌细胞吗? 有无限增殖能力的细胞是肿瘤细胞， 具有转移能力的肿瘤细胞，称为癌细胞， 所以说，瘤细胞不能等于癌细胞。 10、此过程应用了什么技术： 动物细胞融合、动物细胞培养 特异性强，灵敏度高 单克隆抗体的制备过程中：单克隆指什么？ 11、单克隆抗体含义：克隆单个杂交瘤细胞所产生的抗体，即为单克隆抗体，其本质是蛋白质。 这里的单克隆确有单个细胞克隆的含义，只不过克隆的不是B淋巴细胞，而是杂交瘤细胞。 1、单抗的制备过程要点： 单克隆抗体的制备 制备过程： 1.注射抗原的目的是什么？ 2.诱导其融合的方法有哪些？ 3.融合后培养液中有几种细胞？ 4.怎样筛选出杂交瘤细胞，杂交瘤细胞 有何优点？ 5.为何要进行克隆化培养和专一抗体检测， 多次筛选？ 6.大量增殖杂交瘤细胞获得单抗的方法? 3）、为何要进行两次筛选？ 4）、如何进行第2次筛选？ 培养在多孔培养板上，每孔只有一个杂交瘤细胞。 第1次筛选得到杂交瘤细胞（多种）。第2次筛选得到能产生特异性抗体的杂交瘤细胞群。 问题强化： 1）、本过程利用了哪些原理？ 免疫原理，细胞融合原理和动物细胞培养原理 2）、为什么选用小鼠骨髓瘤细胞与B细胞融合？ 这样融合成的杂交瘤细胞，继承了双亲细胞的遗传物质，不仅具有B细胞分泌抗体的能力，而且还有无限增殖的本领，因而可以获得大量单克隆抗体 (1)作为诊断试剂：准确识别各种抗原物质的细微差异，并与一定抗原发生特异性结合 3 单克隆抗体的应用 优点：准确、高效、简易、快速 优点：位置准确、疗效高、副作用小） 5.体细胞核移植技术的应用前景 (1)、加速家畜遗传改良进程，促进优良畜群繁殖 (2)、保护濒危动物 (3)、生产医用蛋白 (4)、作为异种移植的供体 6.体细胞核移植技术存在的问题 看书P49