抗P-21 激活磷酸化蛋白激酶5 多克隆抗体制备其在牙胚细胞研究中应用.docVIP

抗P-21激活的磷酸化蛋白激酶5多克隆抗体的制备及其在牙胚细胞研究中的应用 作者：安政雯1,2；刘宏伟1,3；贾志敏4；李照峰1；Staffan Str觟mblad2；张宏权2　　(南方医科大学1南方医院口腔科，4药学院，广东 广州510515；2Karolinska Institute Department of Biosciences and Nutrition, Sweden Huddinge SE-141 57；3同济大学附属口腔医学院，上海??200072) 摘要：目的??克隆PAK5-N 端基因并诱导其表达，进行多克隆抗体制备，为研究其在牙胚细胞中的生物学功能奠定基础。方法??根据人全长PAK5 cDNA序列，设计引物；利用PCR技术，以PAK5 全长cDNA为模板扩增PAK5-N端基因，将扩增产物克隆至pGEX-4T-1载体中，经EcoRI /XhoI 双酶切后进行重组质粒鉴定，DNA测序。以硫代半乳糖苷诱导其在大肠杆菌BL21中表达。利用GST融合蛋白纯化系统进行蛋白纯化，通过免疫家兔制备多克隆抗体，并在牙胚细胞中进行了初步研究。结果和结论??成功克隆了PAK5-N端基因，在E.coli中表达了PAK5-NT，并纯化了GST融合蛋白，制备了PAK5特异性抗体。Western blotting 表明PAK5 在牙胚细胞中过度表达，为其在口腔细胞中的生物学功能研究提供