第四章免疫学检测技术ppt.ppt

一、免疫学检验原理 抗原-抗体反应：指抗原与相应抗体在体内、外发生高度特异性结合反应。由于实验所用的抗体存在于血清中，故又称血清学反应（serological reaction) 应用： 用已知抗原检测未知抗体； 用已知抗体检测未知抗原： 定性或定量检测体内各种分子； 用已知抗体检测半抗原物质。 交叉反应（cross reaction）性：若两种抗原分子有一个或数个相同（或相似）的决定基，则针对一种抗原的抗血清可与另一种抗原发生反应。 比例合适： 若抗原、抗体的数量比例合适，抗体分子的两个Fab段分别与两个抗原决定基结合，相互交叉连接成网格状复合体，则反应体系中基本不存在游离的抗原或抗体，此时形成肉眼可见的反应物（沉淀物或凝集物）。 因此，确定反应体系中抗原、抗体的最适比例十分重要。 前带现象（prozone）和后带现象(postzone) Ab过剩和Ag过剩　 4.抗原和抗体的性质 抗体的特异性和亲和力是决定抗原-抗体反应的关键因素。 此外，抗原理化性质、抗原决定基多寡和种类等均可影响抗原-抗体反应。 1．直接凝集（direct agglutination) ： 细菌或红细胞与相应抗体直接反应，可出现细菌或红细胞凝集现象。 2．间接凝集（indirect or passive agglutination) ： 检测针 对可溶性Ag的Ab 3．间接凝集抑制试验 (direct agglutination inhibition test) 4. 协同凝集试验（co-agglutination test） 载体为金葡菌，其细胞壁蛋白A与IgG 的Fc结合，用于细菌、病毒的快速检测。 妊娠免疫诊断试验 孕妇尿中，绒毛膜促性腺激素（HCG）含量明显增高。（HCG是可溶性抗原 ） 反之，非孕妇尿中HCG含量甚微，不足以消耗掉抗HCG抗体。 大多沉淀反应多用半固体琼脂凝胶作为介质进行琼脂扩散或免疫扩散，即可溶性抗原与抗体在凝胶中扩散，在比例合适处相遇即形成可见的白色沉淀。 1．单向免疫扩散(single immunodiffusion) 2．双向免疫扩散(double immunodiffusion) 单向免疫扩散(Single Immunodiffusion) 是将一定量已知抗体混于琼脂凝胶中制琼脂板，在适当位置打孔后将抗原加入孔中扩散。抗原在扩散过程中与凝胶中的抗体相遇，形成以抗原孔为中心的沉淀环，环的直径与抗原含量成正比相关。本法常用于测定血清IgG、IgM、IgA 和 C 3等的含量。 双向免疫扩散 （Double Immunodiffusion) 是将抗原与抗体分别加入琼脂凝胶的小孔中，二者自由向周围扩散并相遇，在比例合适处形成沉淀线。如果反应体系中含两种以上的抗原抗体系统，则小孔间可出现两条以上的沉淀线。本法常用于抗原或抗体的定性 、组成和两种抗原相关性分析的检测。 已知抗原加入血清（检测抗体） （1）直接荧光法：荧光素直接标记抗体，对标本进行检测。该法优点是特异性高，缺点是检查任一抗原均须制备相应荧光抗体。 （2）间接荧光法：用一抗与标本中抗原结合，再用荧光素标记的二抗进行检测。该法优点是敏感度比直接法高，制备一种荧光素标记的二抗即可用于多种抗原的检测,但非特异性反应亦增强。 常用的方法如下： （1）酶联免疫吸附试验 (enzyme linked immunosorbent assay，ELISA) 分类： （1）放射免疫分析法(radioimmunoassay, RIA) （2）免疫放射分析法（immunoradiometric assay, IRMA） 属于非竞争性放射性配体结合分析技术。他与RIA为代表的竞争性放射性配体分析技术的区别主要有两点：一，放射性核素标记的是抗体而不是抗原，其二是采用过量抗体而不是限量抗体。RIMA与RIA相比较，提高了检测的灵敏度并使检测范围增宽，特异性和精确度进一步提高。 免疫放射分析法有以下特点： 1.以标记抗体作为示踪剂 2.反应动力学：因标记抗体是过量的，且反应是非竞争性 的，抗原抗体是全量反应，故反应速度比RIA快。 3.灵敏度明显高于放射免疫分析，约为放射免疫分析的10～100倍。 4.标准曲线工作范围宽。 5.特异性高。 6.稳定性好。 免疫胶乳试验应用 胶乳凝集试验 原理： 胶乳凝集试验是一种间接凝集试验，它是以聚苯乙烯胶乳微粒作为惰性载体。胶乳为人工合成的载体，因此其性能比生物来源的红细胞稳定，均一性好。但胶乳与蛋白质的结合能力以及凝集性能不如红细胞，因此作