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湖北中医学院 硕士研究生毕业论文
中文摘要
目的：
参照朱仁廉主编的《中医外科学》“’里中医辨证分型相关标准对非黑素瘤细
胞4陛发获辨瘩《no躲elano弧sk}n
c8ncef)患者送行中医毒歪垄分盔，采翊常筑
sechain
聚合姆链反应(Polymerareaction)和巢式聚合嗨链反应(Nested
ehain
轴lymeraseReaGtion)的方法采检测NMsc患者姐织标本中的一类特殊型
HPV(EV型)，势对扩增产物D默进褥测序，量在研究N鲢sc中医证銎与gpv感染是否
存在相关性。
糖耪：
标本泉源于武汉市第一医院皮肤科门诊，40名患老均经过蟪泰粒缝织痰璎
ce“
确诊为NMsc。其中包括：①新鲜手术组织标本20例：鳞状细胞癌(squamous
eell
carcinolll8)8锯，鏊底缎憨瘸泊8s＆l
cafeino糯a)12镄。手术留下组织
后立刻保存于一70℃冰箱。⑦HMsc_石蜡包埋组织标本20例：sccl5例，Bcc5例。
方法：
1．分短：参照《孛驻终辩学》“1里中医辨证分型标准将N艇sc患者分残疆鳃，莫中
疮感风毒型11例、肝火血燥型6例、党气虚弱型15例、肝肾亏损型8例。
2。新鲜手术标本D貅昀旋取：④簿3—5mg组织研磨后加入200ul1譬缓冲液和
继续孵育24小时；95℃水浴加热10min，得到DNA粗提物。②DNA粗提物经
运羚、蘸仿、异残醇、异弼簿、乙醇等笺耗嚣淀洗涤干潦等符虱穰板D黻。
GGTCA(e／T)AA(C／T)AATGG(C／T)AT3’
《c／T)A(A／G)A￡(A／G)A(A／罩)AlTG
fA／G)Tc3’，§}另l位子HP￥一8墓爵
位匿)对新鲜手术标本进行巢式PCR，扩增HPVDNA。cP65一cP70扩增后得到
蓄翡片狡为452一《67bp曲产物；然后阑eP66一eP69进行第2步扩蹭得到舀的
片段为370bp左右的终产物。
0u
4．石蜡包埋组织标本的DNA提取：④切lm厚石蜡包埋组织标本的切片5片，
溶液和30ul
一次。95℃水浴加热10min，得到DNA粗捉物。②DNA粗提物缀过酚、氯仿、
异残醇、吴舞簿、乙蓦等纯佬淀淀洗涤干缫等褥刭模板潍A。
《A／c／G)(A／e／T)e螺l强lec矗lc3’)对石蜡惫埋组织标．零D激扩趱。
6．B．G10bInl，B．GIobin2参照PcR：
2，岱lGlobin2：
7．对部分扩增产物进行测序，测序结果与GenBank上的己知序列进行对比、分型。
2
湖北中医学院 硕上研究生毕业论文
8．分析检测的HPVDNA阳性结果，对比中医证型分组，比较各证型与HPv
DNA阳性率高低有无相关性。
结果：
PcR扩增，有6个标本出现约370bp左右的条带。其中8个scc标本中阳性的有
3个，占37．5
5％，12个Bcc标本中阳性标本有3个占25％，6例中属于正虚组的
标本有5例阳性，其中元气虚弱证4个、肝肾亏损证1个，邪实组中仅疮感风毒
出现约240bp条带，15个scc标本中阳性标本4个，占26．7％，5个Bcc标本中
阳性的有1个，占20％，5例阳性全部属于正虚组其中元气虚弱证4个、肝肾亏
损证1个。
对PcR进行产物测序，测序结果与GenBank上的己知序列进行对比、分型，
结果均为HPV一扎
结论：
1．我科门诊NMsc患者中感染HPV的患者主要集中在元气虚弱证和肝肾亏损
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