分子生物学操作基本课件.ppt

取出感受态细胞，（如果在-70℃冰箱中，需要将管握于手心，融化细胞），每管200μl,立即将eppendorf离心管放到冰浴中，放置10min； 将待转化的DNA加入到感受态细胞中，轻轻旋转几次，混匀内容物，冰上放置30min；（DNA量不应超过感受态细胞体积的5%）； 冰上放置20～30min，然后42℃水浴热激90Sec，迅速冰上冷却2min； 立即向上述Ep管中加入0.8mL LB液体培养基，摇匀后于37℃振荡培养约15～30min ，使受体菌恢复正常生长状态及表达抗性基因； 5、取培养液50μL接种于含抗生素的LB平板培养基上，用玻璃涂棒涂匀；（或浓缩后涂布，留下1/10备用） 6、将培养皿放在37℃恒温培养箱培养30 min,待菌液完全被培养基吸收后（无菌风吹干），倒置培养皿，于37℃恒温培养箱内培养过夜(14-16h) 。 ?－半乳糖苷酶(LacZ)能够作用于生色底物5－溴－4－氯－3－吲哚－?－D－半乳糖苷(X-gal)而产生蓝色的菌落，所以利用这个特点，在载体的该基因编码序列之间人工放入一个多克隆位点，当插入一个外源DNA片段时，会造成LacZ基因的失活，，就不能产生具有活性的酶。所以，有重组质粒的菌落为白色，而没有重组质粒的菌落为蓝色。 蓝白斑筛选： 转化子筛选策略：LB+Cm+Ga（双抗平板） Pseudomonas putida Cm