聚合酶链式反应(PCR)基本原理重点.pptVIP

聚合酶链反应（PCR） 一、PCR的概念； 二、PCR的基本原理； 三、PCR反应条件的优化； 四、PCR操作的注意事项。 一、概念： 聚合酶链反应（polymerase chain reaction，PCR）扩增技术，即体外试管内DNA的扩增，以高特异性、高灵敏度、高效率及忠实性等特点，在生命科学研究领域产生着巨大的影响。 二、PCR的基本原理 PCR技术实际上是DNA的体外扩增技术。 其原理类似于DNA在体内的复制过程。 反应条件――模板DNA、寡核苷酸引物、DNA聚合酶、四种dNTP原料和合适的缓冲液体系，在一定的温度下，经过重复的过程，就可以完成DNA的体外合成。 这些过程都是通过控制温度来实现的，即通过改变温度引起变性（denature）、退火（annealing）和延伸（extension），使DNA得以复制。 1、变性 通过加热至95℃左右，使DNA双螺旋的氢键断裂，形成单链DNA，作为反应的模板。 2、退火 将温度降至引物的Tm值左右或以下（比Tm低5℃，通常为55～65℃），引物与DNA模板互补结合，形成杂交链。 3、延伸 在DNA聚合酶（一种耐热的DNA聚合酶）的作用下，于70～74℃以引物3′端为起始点按5′→3′方向使DNA新链延伸。 上述三步为一个循环，每一循环的产物作为下一个循环的模板，如此经过25－30个循环，可使新生