试剂配方-Simgen.docVIP

酵母DNA试剂盒说明书 产品组成 酵母DNA试剂盒次制备 2 ml离心管 Lyticase Buffer YE Buffer PL Buffer K Buffer WA（浓缩液） Buffer WB（浓缩液） Buffer TE 说明书 5个 5个 30 mg 4 ml 3 ml 2 ml 1.9 ml 1.5 ml 1.2 ml 1份 产品储存与有效期 Lyticase请于2－8℃储存,配制成100mg/ml的Lyticase溶液请℃储存。 ℃），可在两年内保持使用性能无明显变化；如果将产品储存于2~8℃，可延长产品的有效期至两年以上。 技术支持 杭州新景生物试剂开发有限公司研发部：e-mail: technical@, 电话：400-0099-857。 产品介绍 本产品可从≤1.0×108 酵母菌培养物中℃。 将水浴锅温度设置到37℃和65℃，并将Buffer PL和Buffer TE温育至℃。μl Buffer YE配制成100mg/ml的Lyticase溶液。 根据试剂瓶标签上的指示在Buffer WA和Buffer WB中加入无水乙醇，并在标签的方框中打勾作好“乙醇已加”的标记。 操作步骤： 1. 用1.5 ml离心管收集≤1.0×108酵母菌，12000rpm离心30秒，用移液器弃尽培养液上清，加入500 μl Buffer YE，漩涡振荡使菌体悬浮起来。 * 1 ml OD600=1的酿酒酵母培养物中的酵母菌数量大约为2×107酵母菌，如果菌液浓度较低可以通过多次离心的方法使菌体沉淀收集到同一个离心管中。2. 加入50 μl Lyticase溶液，37℃水浴30分钟。 * 根据酵母的菌株和酵母细胞数量的不同，可适当延长水浴时间至60分钟。 3. 5000 rpm 离心1分钟，用移液器弃尽上清，加入0 μl 65℃预热的Buffer PL，旋涡振荡。* 水浴期间每隔2～3分钟漩涡振荡离心管数秒以帮助DNA的释放。 4. 加入350 μl Buffer K，盖上管盖，用力摇晃15秒，剧烈漩涡振荡30秒。 * 如果从新鲜中提取DNA，会将中的RNA一起分离纯化出来，但是RNA的存在并不影响PCR相关的实验。如果要除去RNA污染，可在本步骤中补加4 μl RNase A 储存液（100 mg/ml，本试剂盒不提供）。. 13000 rpm离心5分钟。 6. 将步骤5中的上清液倒入到核酸纯化柱（核酸纯化柱置于2ml 离心管中）中，盖上管盖，12000 rpm 离心30秒。 7. 弃2ml 离心管中的滤液，将核酸纯化柱置回到2ml 离心管中，在核酸纯化柱中加入500 μl Buffer WA, 盖上管盖，12000 rpm 离心30秒。 * 确认在Buffer WA中已经加入无水乙醇。 * 滤液无须彻底弃尽，如果要避免粘附在离心管管口的滤液对离心机的污染2ml 离心管在纸巾上倒扣拍击一次。* 如果离心机没有防泄漏的盖子，请将000 rpm 离心，以免1.5ml离心管管盖脱落而损伤离心机。 杭 州 新 景 生 物 试 剂 开 发 有 限 公 司 地址：浙江省杭州市西湖科技经济园西园八路2号H座2601 邮编：310030 电话：0571传真：0571 仅供科研使用，请勿用于人体及动物的治疗或临床诊断。 Ver.3