吉西他滨和AMD3100联合应用于胆管癌RBE细胞株对CXCR4%2fCXCL12轴的作用.pdf

中文摘要 吉西他滨与AMD3100联合应用于胆管癌RBE细胞株对 CXCR4／CXCLl2轴的作用 摘 要 目的：AMD3 过程，并快速有效动员骨髓造血干细胞和间充质干细胞，抑制肿瘤细胞的 生长和转移。目前发现，AMD3100能够通过将某些肿瘤细胞动员到周围 循环中，破坏肿瘤赖以生长的微环境，从而增加肿瘤细胞对细胞毒药物的 敏感性，促进肿瘤细胞的凋亡。 了一种新的思路，使其作为细胞毒药物的辅助剂或者增强剂应用于肿瘤治 疗。当前AMD3 100应用于肿瘤治疗日益受到关注，越来越多的专家医者 将AMD3100与其它药物联合应用，以达到更有效治疗肿瘤的作用。 胆管癌作为恶性肿瘤的一种，其细胞中过高表达CXCR4。研究表明 正常胆管中没有CXCLl2和CXCIⅥ蛋白的表达，但是在胆管癌中， CXCR4蛋白的表达更高，为94％，明显高于无转移的胆管癌细胞，所以 可将CXCR4作为判断胆管癌恶性程度高低及预后的指标之一，并且利用 CXCR4的阻断剂AMD3100治疗胆管癌在理论上具有一定的效果。但是， 目前胆管癌的临床疗效较差，关于AMD3100治疗胆管癌的效果也未见报 、j止 追。 因此，在前期研究的的基础上，我们将AMD3100联合吉西他滨，检 测不同浓度时对胆管癌细胞株RBE增殖能力和侵袭能力的影响，不同浓度 时对CXCR4的影响等。通过分析二者关系，探讨AMD3100对胆管癌的 1 治疗效果，为AMD300能否成为临床治疗胆管癌的药物提供实验依据。 方法： 1通过MTT方法检测不同浓度的吉西他滨处理胆管癌RBE细胞株24h 后细胞生存率变化，MTT实验检测CXCR4基因激动或阻断以及联合化 疗药物吉西他滨后对胆管癌RBE细胞增殖的影响。 万方数据 中文摘要 将对数生长期的胆管癌RBE细胞消化成单细胞混匀，取适量细胞放 利用MTT方法检测细胞存活率；将吉西他滨按照0、0．625、1．25、2．5、 5、1 0urn给药浓度进行MTT试验检测细胞存活率。 侵袭性的变化，同时检测AMD3100联合吉西他滨对细胞侵袭性的变化。 24h，再进行福尔马林固定、结晶紫染色，晾干后放于倒置显微镜下观察。 AMD3100及联合吉西他滨对CXCR4 达变化。 他滨处理，提取细胞全蛋白，用BCA方法测定蛋白浓度，再用SDS．PAGE 分离蛋白，最后用免疫印迹(West．blot)进行分析。 4采用RT-PCR技术检测胆管癌细胞CXCR4mRNA的转录，检测 VEGF．C、N型钙粘素MMP．9等侵袭相关因子mRNA的转录变化。 结果： 1 100、SDF。1 MTT法检测吉西他滨、AMD3 Q以及联合用药组对胆 管癌RBE细胞生长的影响。 MTT法检测结果为，药物作用24h后，在吉西他滨浓度为O．33、3．33、 106．20％；SDF一1 Q，细胞 Q联合 用药组也未见明显差异。 综上结果表明，吉西他滨能够明显促进胆管癌RBE细胞的生长，且 呈剂量依赖性，随着吉西他滨浓度的升高细胞生存率逐渐降低。 2Transwell法观察各用药组对胆管癌RBE细胞的侵袭性的变化。 万方数据 中文摘要 下层细胞数目明显多于空白组、AMD3100组以及吉西他滨与AMD3100 联合用药组，空白组与AMD3100单药组差异性不明显，联合组介于之间。 3 用后48h收集，提取总蛋白检测。先前实验结果发现CXCL．12