动物细胞培养和核移植技术(上课用的)详解.ppt

一、动物细胞培养 动物细胞培养就是从动物机体内取出相关的组织，将它分散成单个细胞，然后，放在适宜的培养基中，让这些细胞生长和增殖。 探究 5、动物细胞培养条件： ①无菌、无毒的环境 （添加一定量的抗生素，定期更换培养液） ②营养 （葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素、动物血清等。） ③温度和pH 36.5±0.5℃, 7.2-7.4 ④气体环境 O2和CO2（95%空气和5% CO2 ） ① 成功率低 ② 克隆动物存在健康问题 ③ 克隆动物食品的安全性问题存有争议 知识结构 动物细胞培养和核移植技术 * 李国城 1、概念： 2、原理： 细胞增殖 一、动物细胞培养 阅读“动物细胞培养过程”并思考： 1、简述动物细胞培养的操作过程 2、用胰蛋白酶对动物组织进行处理是因为细胞间的物质主要是什么？用胃蛋白酶可以吗？ 3、胰蛋白酶真的不会把细胞消化掉吗？ 为什么？ 动物细胞培养过程 3、动物细胞培养过程 动物胚胎或幼龄动物的组织、器官 细胞悬浮液 胰蛋白酶或胶原蛋白酶 10代细胞 50代细胞 传代培养 细胞株 无限传代 细胞系 单个细胞 加培养液 遗传物质未改变 遗传物质已改变 动物组织细胞间隙中含有一定量的纤维蛋白，将细胞网络起来形成具有一定弹性和韧性的组织和器官。 （水解纤维蛋白） 原代培养 使组织细胞分散开的目的：①能保证细胞所需要的营养供应；②有利于细胞内有害代谢产物的及时排出 传代培养一般传至10代直至50代就不能再分裂了，这时细胞核内遗传物质未发生变化，形成的细胞群 传代培养过程中有个别细胞传至50代以后，由于遗传物质改变，失去控制，成为无限增殖的不死的癌症细胞，形成的细胞群 4、结果：动物细胞培养最终不形成生物体 （3）能否用胃蛋白酶代替胰蛋白酶吗？为什么？ （1）动物细胞培养取材时，一般是取胚胎组织或幼龄动物的组织或器官，请解释原因？ 不能，因为动物细胞培养适宜的pH为7.2—7.4，此环境下胃蛋白酶（pH=2.0）没有活性。 胚胎组织或幼龄动物的组织或器官生命力旺盛，分裂能力强，容易培养 （2）如何将动物组织分散成单个的细胞呢？ 先用剪刀剪碎,后用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理 （4）胰蛋白酶真的不会把细胞消化掉吗？为什么？ 胰蛋白酶除了可以消化细胞间的蛋白外，长时间的作用也会消化细胞膜蛋白，对细胞有损伤作用，因此必须控制好胰蛋白酶的消化时间。 （5）什么叫细胞贴壁和接触抑制？ 悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上的现象，称为细胞贴壁。 当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，细胞就会停止分裂增殖，这种现象称为细胞的接触抑制。 探究 50代以后 失去接触抑制 接触抑制 （6）什么是原代培养、传代培养？为什么要进行传代培养？ 原代培养： 取材（动物组织） →细胞分散→初次培养 传代培养： 培养的细胞→细胞分散→继续培养 进行传代培养的原因： 接触抑制 细胞悬浮液 10代细胞 50代细胞 无限传代 原代培养 传代培养 细胞株 细胞系 如何界定原代培养和传代培养；细胞株和细胞系？ 遗传物质改变 提供有利于细胞生长增殖的激素、生长因子或提供合成培养基所缺乏的营养物质等 6、动物细胞培养的应用 ①获得细胞产物，如蛋白质生物制品－病毒疫苗、干扰素、单克隆抗体等 ②用于检测有毒物质，判断某种物质的毒性 ③用于生理、病理、药理等方面的研究 培养结果 培养目的 培养基特有成分 培养基 类型 原理 动物细胞培养 植物组织培养 比较项目 细胞的全能性 细胞增殖 植物组织培养和动物细胞培养的比较 固体培养基 液体培养基 蔗糖、植物激素 葡萄糖、动物血清 植物体 细胞株、细胞系 快速繁殖、培育无病毒植株等 获得细胞或细胞分泌蛋白 卵细胞 Ａ母绵羊 Ｂ母绵羊 乳腺细胞 细胞质 细胞核 早期胚胎 卵裂 C母绵羊子宫 多莉羊 分娩 妊娠 融合后的卵细胞 多莉羊的培育过程 二、动物体细胞核移植技术 和克隆动物 动物核移植是将动物的一个细胞的细胞核，移入一个已经去掉细胞核的卵母细胞中。使其重组并发育成一个新的胚胎，这个新的胚胎最终发育为动物个体。（克隆动物） 1、动物核移植： 2、分类 胚胎细胞核移植： 体细胞核移植： 细胞分化程度低，恢复全能性容易 细胞分化程度高，恢复全能性不容易 2、为什么不是取供体细胞核进行核移植操作，而是直接将供体细胞整个注入去核卵母细胞中？ 保证供核不被破坏，使所得个体的性状更符合供体。 1、受体细胞为什么选用卵母细胞？