季的花药培养(定稿)总结.ppt

授课教师：李琳 注意： ①二核花粉粒：成熟的花粉粒中，只含花粉管细胞核和生殖细胞核。（精子在花粉管中形成） ②三核花粉粒：有些植物的花粉，在成熟前，生殖细胞进行一次有丝分裂，形成两个精子，这样的花粉在成熟时，含有一个营养核和两个精子。 ③两个精子和一个营养核的基因型相同。 1、材料的选择 不同植物的诱导成功率不同. 同一植物亲本的不同生理状况也对诱导成功率有直接的影响. 合适的花粉发育期（单核居中期与靠边期之间） （二）材料的消毒 5、无菌水冲洗3～5次 花药的外面有花萼、花瓣保护，通常处于无菌状态 （三）接种和培养 灭菌后花蕾，要在无菌条件下除去萼片和花瓣，并立即将花药接种到培养基上。 在剥离花药时，要尽量不损伤花药（否则接种后，容易从受伤部位产生二倍体的愈伤组织），同时还要彻底去除花丝，因为与花丝相连的花药不利于愈伤组织或胚状体的形成。 通常每瓶接种花药7-10个，温度控制在25℃左右，不需要光照。幼小植株形成后才需要光照。 一般经过20-30天培养后，会发现花药开裂，长出愈伤组织或释放出胚状体。将愈伤组织及时转移到分化培养基上，以便进一步分化出再生植株。 （三）、接种和培养 1、剥取花药 * 简述其它条件，低温处理有助于脱分化，然后简讲培养基的组成；最后分析材料的选择并由此引入镜检和消毒的处理！ 注：花粉细胞核内有染色体，染色体主要由DNA和蛋白质组成，醋酸洋红为碱性染色剂，染色体容易被染色。通过染色，可以确定细胞核为单核期还是双核期，是单核居中期还是单核靠边期。一般单核靠边期的花药培养成功率最高。 植物的花药培养和单倍体育种的关系 花粉粒（1N） 单倍体植株（1N） 二倍体纯合子植株（2N） 缩短了育种周期，为新品种的培育开辟了新途径。 花药离体培养 人工诱导染色体数加倍 花的结构 花丝 花药：囊状结构，内有很多花粉 花粉是由花粉母细胞（即小孢子母细胞）经过减数分裂而形成的，因此，花粉是单倍体的生殖细胞。 花粉的发育要经历：四分体时期、单核期、双核期等阶段。 （一）被子植物的花粉发育 雄蕊 （一）被子植物的花粉发育 被子植物花粉的发育过程 四分体时期 单核期 双核期 1花粉母细胞（2n） 4个小孢子(小孢子 四分体)（n） 减分 有分 1个花粉管细胞核（n） 1个生殖细胞核（n） 有分 2个精子 单核居中期（n） 单核靠边期（n） （二）产生花粉植株的两种途径 ① ② 移栽 花药中的花粉 胚状体 脱分化 愈伤组织 花药中的花粉 脱分化 分化 丛芽 再分化 丛芽 诱导 生根 体细胞胚（胚状体）：在组织培养过程中，某些细胞在形态上转变为与合子发育成的胚非常相似的结构，发育过程亦与合子胚类似 这两种途径之间没有绝对的界限，主要取决于培养基中激素的种类及浓度配比。 (三)、影响花药培养的主要因素 ——材料的选择与培养基的组成 从花药看：月季的初花期（五月初到五月中旬） 从花粉看：单核期（一般来说，细胞核核从中央移向细胞一侧的时期，花药培养成功率最高） 从花蕾看：完全未开放的 此外，植株生长条件、材料低温预处理、接种密度等对诱导成功率有一定影响。 2、培养基的组成 （ MS培养基+不同比例的植物生长调节激素） 实验操作 材料选取 材料和 消毒 接种和 培养 实验操作（一）材料选取 通过镜检来确定是否处于适宜的发育期。 方法：醋酸洋红法(将染色体染成红色) 对于某些植物的花粉细胞核不易着色使用 焙花青-铬矾法(花粉细胞核染成蓝黑色)。 从花药看：月季的初花期 从花粉看：单核期 从花蕾看：完全未开放的 1.我们怎样选择想要的花粉呢？ 2.我们怎样保证所选的材料处于单核期？ 为什么花瓣松动会给材料的消毒带来困难？ 答：花瓣松动后，微生物就可能侵入到花药，给材料的消毒带来困难。 1、花蕾用体积分数为70%的酒精浸泡30秒 2、无菌水清洗 3、无菌吸水纸吸干花蕾表面的水分 4、放入质量分数为0.1%的氯化汞溶液中2～4分钟 （质量分数为1%的次氯酸钙溶液或饱和漂白粉溶液） 花蕾 （70％酒精） 大约30s （无菌水） 清洗 （无菌吸水纸） 吸干水分 （1％氯化汞溶液） 2～4min （无菌水） 冲洗 月季花蕾的消毒与菊花外植体的消毒相比较，二者有何不同？ 在酒精消毒前，花药不需要预先用流水冲洗、洗衣粉洗涤和软刷刷洗 如果花药开裂释放出胚状体，则一个花药内就会产