微生物实验室培养分析.ppt

请判断： 1.微生物都是原核生物 （ ） 2.微生物肉眼都看不见 （ ） 一 培养基及无菌技术 1.培养基可以分为哪些类型？ 2.培养基的基本营养成分分别是什么？ 3.无菌技术的方法包含哪些内容？ 培养基的种类 按照物理性质划分培养基 例1．关微生物营养物质的叙述中，正确的是: A.是碳源的物质不可能同时是氮源 B.凡碳源都提供能量 C.除水以外的无机物只提供无机盐 D.无机氮源也能提供能量 例2．下面对发酵工程中灭菌的理解不正确的是: A.防止杂菌污染 B.消灭杂菌 C.培养基和发酵设备都必须灭菌 D.灭菌必须在接种前 1. 用平板划线法或稀释涂布平板法纯化大肠杆菌时(　　) ①可以用相同的培养基 ②都需要使用接种针进行接种 ③都需要在酒精灯火焰旁进行接种 ④都可以用来计数活菌 A.①② B.③④ C.①③ D.②④ 2010全国⑴某细菌固体培养基的组成成分是 葡萄糖、尿素、琼脂和蒸馏水，其中凝固剂是 ，碳源是 ，氮源是 。已知只有能合成脲酶的细菌才能在该培养基上生长，该培养基属于 培养基。按照化学成分分类，该培养基属于 培养基。从同化作用类型看，用该培养的细菌属于 。 3.微生物实验室培养的基本操作程序 1、器具的灭菌 2、培养基的配制 3、培养基的灭菌 4、倒平板 5、微生物接种 6、恒温箱中培养 7、菌种的保存 课题2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 一、筛选菌株 无机盐 碳源 氮源 凝固剂 尿素是唯一氮源的选择培养基 二、统计菌落数目 用什么方法统计？ ①稀释涂布平板法 ②显微镜直接计数 一般选择菌落数在 的平板进行计数。 统计菌落数往往比活菌的实际数目 。 30-300 低 （酵母菌）血球板计数法 2.计算公式 每克样品中的菌落数＝（C÷V）×M，其中C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，V代表涂布平板时所用的稀释液的体积（mL），M代表稀释倍数。 稀释涂布平板法统计菌落数目 1.理论依据： 　　恰当的稀释度是成功地统计菌落数目的关键。为了保证结果准确，通常将几个稀释度下的菌液都涂布在平板上，培养后再选择菌落数在30～300的平板进行计数。 三、设置对照 目的：排除无关变量（非测试因素）的影响，提高实验结果的可信度。 (1)空白对照：培养基是否有杂菌污染 (2)牛肉膏蛋白胨培养基和选择培养基对照： 选择培养基是否有选择作用。 选择培养基上的菌落数较少。 四、实验设计 土壤取样?制备培养基?样品稀释?涂布培养?观察统计 1.取样时，一般要铲去表层土。 2.分别制备 的选择性培养基和牛肉膏蛋白胨培养基（判断选择培养基是筛选出分解尿素的细菌） 3.不同的微生物要采用不同的稀释度。 4.每个稀释度需倒6个平板： 4个选择性培养基，3个涂布，1个空白； 2个牛肉膏蛋白胨培养基，一个涂布，一个空白。 以尿素为唯一氮源 将待测样品经一系列10倍稀释，然后选择三个稀释度的菌液，分别取0.1 mL接种到已制备好的平板上，将同一稀释度加到三个或三个以上的平板上；培养后，计算出同一稀释度菌落平均数。 三重复组 求平均值使结果更准确 五、实验结果的分析、评价 (1)空白对照：是否有杂菌污染 (2)牛肉膏蛋白胨培养基和选择培养基对照： 选择培养基是否有选择作用。 选择培养基上的菌落数较少。 结果： 酚红指示剂变_____，初步鉴定该细菌能够分解尿素 操作：在以_______为唯一氮源的培养基中加入 。 尿素 （鉴别培养基） 红色 六、实验结果的鉴定 酚红指示剂 微生物的恒温培养 微生物的恒温培养 菌落 细菌的菌落特征因种而异 课题2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 一、筛选菌株 无机盐 碳源 氮源 凝固剂 尿素是唯一氮源的选择培养基 二、统计菌落数目 用什么方法统计？ ①稀释涂布平板法 ②显微镜直接计数 一般选择菌落数在 的平板进行计数。 统计菌落数往往比活菌的实际数目 。 30-300 低 （酵母菌）血球板计数法 2.计算公式 每克样品中的菌落数＝（C÷V）×M，其中C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，V代表涂布平板时所用的稀释液的体积（mL），M代表稀释倍数。 稀释涂布平板