第二章蛋白质(上)分析.pptVIP

赖氨酸的滴定曲线 茚三酮反应: 蓝紫色，最大吸收峰在波长570nm，氨基酸定性定量分析。 2、氨基酸的化学性质 Pro:亮黄色 λmax＝440nm Sanger反应（2，4-二硝基氟苯） （DNP氨基酸） 弱碱 （DNFB，Sanger试剂） 黄色 DNP-AA 丹磺酰氯（DNS-Cl：5—二甲基氨基萘-1-磺酰氯）常用于多肽链—NH2末端氨基酸的标记和微量氨基酸的定量测定。 N Gly—Ala—Ser—Leu—Phe C→ DNS—Gly—Ala—Ser—Leu—Phe C 水解 DNS—Gly、 Ala、 Ser、 Leu、 Phe DNS-AA在紫外光激发后发黄色荧光。 Edman反应（苯异硫氰酸酯 PITC） 第三节　蛋白质的结构 一、蛋白质的结构层次 蛋白质是由一条或多条多肽(polypeptide)链以特殊方式结合而成的生物大分子。 一级结构（AA序列） 二级结构 三级结构 四级结构（聚合体） 空间结构 * 二、蛋白质的一级结构(共价结构） 肽(peptide):是由一个AA的α-羧基与另一个AA的α-氨基缩合脱水而形成的化合物。 肽键(peptide bond)：是由一个氨基酸的?-羧基与另一个氨基酸的?-氨基脱水缩合而形成的酰胺键。 肽链的书写及命名 书写：把含自由α-氨基的AA一端放左边（称为N-末端 或氨基末端）；把含自由α-羧基AA放在右边（称 为C-末端或羧基末端）。 命名：从肽链的N-末端开始，按照AA在肽链中顺序逐一 称为某氨基酰某氨基酰······某氨基酸。 如上面的肽称为：丙氨酰甘氨酰酪氨酰谷氨酸 CH2 H2N-CH-C-NH-CH-C-NH-CH-C-NH-CH-COOH CH3 = — O — H = O — CH2 — — OH = O — — CH2 — COOH 几种生物活性肽 1. 谷胱甘肽(glutathione, GSH) C—NH—-CH-C-NH-CH2COOH CH2 = — O — = O — SH — COOH — CHNH2 — CH2 CH2 α β γ δ — γGlu-Cys-Gly S S — γGlu-Cys-Gly ︱ 还原型谷胱甘肽（GSH） 氧化型谷胱甘肽（GSSG） 2GSH GS-SG -2H +2H 二硫键 2.胰岛素 蛋白质的一级结构：蛋白质多肽链中的氨基酸序列，也包括多肽链中连接氨基酸残基的共价键，主要是肽键和二硫键。 氨基酸中的α-氨基与2，4-二硝基氟苯（DNFB）在弱碱性溶液中作用，生成二硝基苯氨基酸（DNP氨基酸）。这个反应首先被英国的Sanger用来鉴定多肽或蛋白质的末端氨基，曾经广泛地应用于测定AA在多肽或蛋白质中的排列顺序。 α-氨基另一个重要的反应是与异硫氰酸苯酯（PITC）在弱碱性条件下形成相应的苯氨基硫甲酰衍生物（PTC-AA）。PTC-AA在硝基甲烷中与酸作用发生环化，生成相应的苯乙内酰硫脲衍生物（PTH-AA），可用层析法加以分离鉴定。这个反应首先为Edman用来鉴定多肽或蛋白质的N-末端AA。该反应是迄今为止在蛋白质或多肽顺序测定技术中，最有效和最基本的方法。 多个AA可按同样的方式脱水，缩合成多肽。 谷胱甘肽广泛存在于动植物及微生物中，这是一种三肽，由谷氨酸、半胱氨酸及甘氨酸组成的。 LOGO 第二章　蛋白质 第二节 氨基酸 第三节 蛋白质的结构 第四节 蛋白质结构与功能的关系 第一节 蛋白质在生命活动中的作用 第五节 蛋白质的溶解性质及分离鉴定 第一节? 蛋白质在生命活动中的作用 一、蛋白质的概念 蛋白质(protein):是由氨基酸(amino acids)通过肽键(peptide bond)相连形成的高分子含氮化合物。 二、蛋白质的分类 按分子形状和溶解度分为： 　　　球状蛋白质 纤维状蛋白质 2.按组成分为：简单蛋白质　结合蛋白质 3.按功能分：酶、调节蛋白、贮存蛋白、转运蛋白、运动蛋白、结构蛋白、防御蛋白等。 三、蛋白质的元素组成 碳 50% 氢7% 氧23% 氮16% 硫 0-4% 微量的磷、铁、铜、碘、锌、钼 凯氏（Kjeldahl)定氮：样品中蛋白质的含量 (%) = 每克样品含氮克数× 6.25×100 1/16% 蛋白质系数 四、? 蛋白质在生命活动中的作用 1． 酶 2．结构成分（胶原蛋白、α-角蛋白、丝心蛋白） 3．贮藏（卵清蛋白、酪蛋白、种子蛋白） 4．转运（血红蛋白、血清清蛋白、电子传递体） 5．运动（肌肉收缩的肌球蛋白、肌动蛋白） 6．接受、传递信息（受体蛋白，味觉蛋白） 7．调节（胰岛素、生