第四章 微生物的生理分析.pptVIP

2）固体培养基（“团”） 人工做法——(与果冻方法一样) 向液体培养基中加入2％左右的琼脂，加热至100℃溶解，40℃下冷却并凝固。 石花菜(红藻）→琼脂 琼脂主要成份—半乳聚糖，分子量大，呈网状粘着力强，溶解分散（温度为96℃以上） 条状琼脂 粉末琼脂 琼脂特性 A.不能被绝大多数微生物利用、分解液化； 提问：有什么好处？ 不作为额外碳源，干扰试验，保持固体特性 B.高压灭菌结构不被破坏，且颜色透明不妨碍观察； C.多数微生物在琼脂培养基表面生长并形成独立菌落； 提问：有何好处？ 易于纯化分离 3）半固体培养基（“膏”） 半——流动性介于固体与液体之间 提问：如何制作？ 在液体培养基中加入0.5%或更低浓度的琼脂 作用：？ 半固体培养基中可以融入少量的溶解氧，因此这种培养基常被用于培养在较低氧浓度环境下才能最佳生长的细菌。 （二）根据培养基组分 天然培养基、合成培养基和半合成培养基。 1）合成 合成——纯化学试剂 2）天然 天然——？ 纯生物制品(细胞提取物) 如，常用的细菌肉汤培养基 牛肉膏 3g 蛋白胨 5g 水 1000mL pH 7.2~7.4 牛肉膏——瘦牛肉经过加热浓缩抽提的膏状物（主要作碳源） 优点——组成成分精确、清楚，重复性强 缺点——很多细菌营养需求较为复杂，配方获取较难 类似物如酵母膏、麦芽汁、土壤浸出液、牛奶、玉米粉 优点——营养丰富、配制容易 缺点？ 质量不稳定、选择性差； 3）复合培养基 在合成培养基的基础上添加些天然成份，以更有效地满足微生物对营养物的需要. 如马铃薯蔗糖培养基。 蛋白胨——动植物蛋白（大豆或动物骨粉等）经初步酶解形成的短肽（主要作氮源） (三)根据培养基用途 选择型、鉴别型、加富型 有两种制备思路： ？ 1）选择性培养基 选择性——？根据不同的微生物对营养的特殊要求，或对物理化学条件的抗性而设计的培养基，利用这一类培养基可以把需要微生物从混杂的其他微生物分离和确定。 待选的细菌能优势生长 ① 取其所抗 常用物质为染料、胆汁酸盐、金属盐类、酸、碱和抗生素。 例如欲分离古细菌，培养基中通常加入青霉素（由于古细菌的细胞壁不同于普通细菌，因而不会被对破坏普通细菌细胞壁结构的青霉素杀死），古细菌就唯一分离并存活下来。 胆汁酸盐——抑制革兰氏阳性菌 它能选择性生长那种细菌？ 革兰氏阴性细菌 待选细菌有抗性 ②投其所好法 好→→→营养、环境因子 （1）专一性营养源培养法 待选细菌专门需要的某种碳源或氮源 例如筛选纤维素分解菌选用纤维素作为培养基中的唯一碳源； 各类降解石化废水特殊有机物的细菌筛选通常是以这类有机物为培养基中的唯一碳源，将目的细菌富集筛选下来。 （2）理化因素控制法 理化因素——特殊的温度、氧气、pH、盐度等环境条件 主要用于筛选极端环境微生物。如嗜盐、嗜热、嗜冷、嗜酸、嗜碱等的细菌，同时也被用于选择性培养好氧或厌氧细菌。 嗜冷菌 嗜热菌 2）鉴别培养基 在培养基中加入某种特殊化学物质,某种微生物在培养基中生长后能产生某种代谢产物,而这种代谢产物可以与培养基中的特殊化学物质发生特定的化学反应,产生明显的特征性变化,根据这种特征性变化,可将该种微生物与其他微生物区分开来。 水处理中常用的远藤氏培养基就是典型大肠菌群内不同种属细菌的鉴别培养基。 加富培养基:由于样品中细菌数量少，或是对营养要求比较苛刻不易培养出来，故用特别的物质或成分配制而成的培养基，称为加富培养基。一般常加入血、血清或动植物提取液等。 3）加富培养基 基础培养基：满足一般微生物生长繁殖所需要的营养物质。牛肉膏蛋白胨培养基是最常用的基础培养基。 肉汤培养基 牛肉膏 3g 蛋白胨 5g 水 1000mL pH 7.2~7.4 培养基的类别 1. 按培养基的成份可分为： 合成培养基 天然培养基 复合培养基 2. 按培养基的物理状态可分为： 液体培养基 固体培养基 半固体培养基 3. 按实验目的和用途可分为： 加富（富集）培养 选择培养基 鉴别培养基 基础培养基 六、营养物质进入细胞的方式 营养物质：水溶性、脂溶性 小分子、大分子 分四种情况 水、无机盐、气体、甘油等小分子 1．单纯扩散 ? 推动力? 推动力—浓度梯度 无载体蛋白 不 内部能量消耗YorN? 2．促进扩散 促进——载体蛋白协助 载体蛋白 细胞外 |