微生物培养和分离上课用论述.ppt

不能使用脱脂棉，否则容易吸水，造成污染。 一旦划破，会造成划线不均匀，难以达到分离单菌落的目的；存留在划破处的单个细胞无法形成规矩的菌落，菌落会沿着划破处生长，会形成一个条状的菌落。 操作的第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物 每次划线前灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后，接种环上残留的菌种，使下一次划线时，接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，以便得到菌落 划线结束后灼烧接种环，能及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者 为什么在造作的第一步以及每一次划线前都要灼烧接种环？在划线结束时，任然需要灼烧接种环？ 2.在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？ 3.在作第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一次划线的末端开始划线？ 划线末端细菌的数目比线条起始处要少，每次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。 以避免接种环温度太高，杀死菌种 稀释涂布法 涂布平板的所有操作都应在火焰附近进行。结合平板划线与系列稀释的无菌操作要求，想一想，第2步应如何进行无菌操作？ 应从操作的各个细节保证“无菌”。例如，酒精灯与培养皿的距离要合适、吸管头不要接触任何其他物体、吸管要在酒精灯火焰周围等等。 微生物的恒温培养 微生物的恒温培养 菌种的保存 1、临时保藏：接种到固体斜面培养基，菌落长成后置于4℃冰箱保存。 2、长期保存：甘油冷冻管藏法 1 ） 血球计数板直接计数 2 ） 比浊法计数 3 ） 稀释涂布平板法计数 微生物数量统计 血球计数板，通常是一块特制的载玻片，其上由四条槽构成三个平台。中间的平台又被一短横槽隔成两半，每一边的平台上各刻有一个方格网。 1 ） 血球计数板直接计数 血球计数板 25×16 16×25 利用血球计数板，在显微镜下计算一定容积里样品中微生物的数量。 每一个大方格边长为l mm，则每一大方格的面积为l mm 2，盖上盖玻片后，载玻片与盖玻片之间的高度为0.1 mm，所以计数室的容积为0.1 mm3。 设五个中方格中总菌数为A，菌液稀释倍数为B，那么，一个大方格中的总菌数(即0.1mm3中的总菌数)为A/5×25×B。 因为:1 ml=lc m3=1 000mm3，故:l ml菌液中的总菌数为： A/5×25×l0×l 000×B 如果待测样品数量稀少，可以直接计数。如果样品密度很大，为了使计数准确，常常将待测样品稀释成不同浓度的菌液，再进行计数。 美蓝染液 用于鉴别酵母菌的活细胞和死细胞。活细胞不着色，死细胞为蓝色。 2 ） 比浊法计数 实验室确定细菌生长密度和生长期，多根据经验和目测推断细菌的生长密度。在遇到要求较高的实验，需要采用分光光度计准确测定细菌细胞密度。OD600是追踪液体培养物中微生物生长的标准方法。以未加菌液的培养液作为空白液，之后定量培养后的含菌培养液。为了保证正确操作，必须针对每种微生物和每台仪器用显微镜进行细胞计数，做出校正曲线。实验中偶尔会出现菌液的OD值出现负值，原因是采用了显色的培养基，即细菌培养一段时间后，与培养基反应，发生变色反应。另外，需要注意的是，测试的样品不能离心，保持细菌悬浮状态。 3）稀释涂布平板法计数 菌落数在30～300间计数效果较好 3）稀释涂布平板法计数 划线分离法和涂布分离法哪个更好呢？ 划线分离：方法简单，但单菌落较难分开。 涂布分离：单菌落更易分开，但操作复杂。 细菌的革兰氏染色 革兰氏染色法是一种用于细菌的染色法。此法将细菌分为两类，即革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌。所谓革兰氏阳性菌就是用革兰氏染液染色后，再用脱色液处理，细菌仍保留染色液的颜色；革兰氏阴性菌则相反。这两种菌的差别在于细胞壁的成分不同。 大肠杆菌属于革兰氏阴性菌 * * * * 　 微生物的利用 微生物包括哪五类： 病毒 细菌 放线菌 真菌 原生动物 原核生物 特点：结构简单,形体微小.通常要用光学显微镜或电子显微镜才能看到，有的甚至没有细胞结构.且体内一般不含有叶绿素.不能进行光合作用. 细菌的外形与大小 细菌细胞微小而透明，通常用适当染料染色后显微镜观察 球菌 杆菌 弧菌 细菌的构造 *细胞壁 细胞壁有哪些功能？ ①固定细胞外形； ②保护细胞免受外力的损伤； ③阻拦大分子物质进人细胞 ④使细胞具有致病性及对噬菌体的敏