Ⅱ-Ⅲ级星型细胞瘤体外诱导耐药细胞——干细胞基因和耐药基因研究.pdf

摘要 目的：初步探讨脑胶质瘤细胞对烷化剂类抗肿瘤药物耐药产生的机理，在诱导产生 耐药细胞的基础上，探讨在耐药形成的过程中，干细胞基因与耐药基因表达的变化， 并尝试找到两者之间的关系，从而为个体化治疗提供依据。 方法：星形细胞瘤细胞由北京大学医学部惠赠，使用含有100ug，mI尼莫司汀 诱导前后肿瘤细胞对尼莫司汀耐受性的差异；使用CDl33抗体标记，流式细胞仪 33阳性细胞数量的变化；用实时荧光定量PCR的方法检测干细 分析诱导前后CDl 变化；采用甲基化特异性高分辨率热溶解法(MS．HRM)检测MGMT基因启动子 区域甲基化水平变化。 结果：在诱导之后，星形细胞瘤细胞在尼莫司汀中增殖活力强于对照，半数抑制浓 度明显提高，对药物ACNU的耐受性增强；诱导前后的星形细胞瘤细胞中CDl33 阳性细胞比例分别为9。74％和0．49％，CDl33阳性细胞数量明显减少；经过药物 诱导后， 差异；MGMT基因表达上调56．6倍，具有极显著差异，MDRl基因表达量没有变 化；两组细胞中，MGMT基因启动子甲基化水平均无明显变化。 结论：通过大剂量烷化荆药物ACNU短期诱导的方法可以获得耐药细胞；该方法得 到的耐药细胞中，干细胞基因的表达下降，耐药基因MGMT的表达明显升高；MGMT 基因启动子甲基化水平与其表达水平之间并不平行。 关键词星形细胞瘤，尼莫司汀，耐药基因，脑肿瘤干细胞，干细胞基因 AbStraCt discussthe ofce伦b陷l Purpose：Tb mechanism drug—resistance g¨omabasing 0nthe ofbraintumOrstemcelI．TbdiscusstheaIterationOfthe cOncept ofstem and resistantinthe 0f expressiOnCe¨genedrug gene processdrug resistanCe ce¨I．nesw．thACNU formation，bygenerat．ngdrug陀sistant induction， and tOdiscOVerthe bet、^，een astO fbr reIa“Onship them，sOpr0Videguidance individualizedtreatment． Methods：The ce¨strainwas astrocytoma proVidedbyPekinguniVerS时heaIth sciencecenter．ThOseceHswereculturedinmedium ACNUw．th Containing cOncentratiOnOf1 fbr5 the waswnhdrawnandthe OOug／mlgeneratiOns，thendrug reSistantce¨st陷inwas di仟brenCeofACNU陀sistancein drug gene陀ted．The tumOrCe¨sbeforeandaf【erACNUinductiOnwas CCK-8methOd cOmpa陀d by aIteratiOnOfCD133 ce¨s befOreandafter qua