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奈瑟菌的分离和鉴定 卫生部北京医院 陈东科 —、脑膜炎奈瑟菌 脑膜炎奈瑟菌(Neisseria.meningitidis)简称脑膜炎球菌，是引起流行性脑脊髓炎（简称“流脑”）的病原菌。多发年龄在5~29岁。对本菌的鉴定是确定诊断的重要依据，同时给临床治疗提供参考价值。 人类是脑膜炎球菌的唯一宿主。流行性脑脊髓炎病人和带菌者是本病的传染源。本病经飞沫传染，潜伏期1~4d。细菌首先侵害鼻咽腔，引起上呼吸道感染或局部炎症。当少量细菌侵入血流时，可引起菌血症突发恶寒、发热、恶心、呕吐等，并有出血或红斑性皮疹及脾肿大。当大量细菌侵入血流时，由血液或淋巴到达脑脊髓膜则发生脑脊髓炎的症状和体症。在我国以A群流行为主。 1. 生物学性状 （1）形态与染色 脑膜炎球菌为革兰阴性双球菌，菌体呈肾形或豆形，成双排列凹面（短轴）相对。由病人体内新分离的菌株有多糖荚膜。 （2）培养特点 本菌为专性需氧菌，营养要求高，5~8%CO2可促进生长，其最适生长温度为36~37℃，最适pH值为7.4~7.6。在巧克力平板上经18~24h培养，形成圆形、光滑、透明、湿润、边缘整齐菌落。直径2~3mm，在血平板上不溶血。培养时间延长，由于细菌自溶酶的作用，菌落可变成酪样或胶样。 （3）生化反应特点 脑膜炎球菌可分解葡萄糖、麦芽糖，产酸不产气。不分解蛋白质，不产生靛基质，不产生硫化氢，不分解尿素，硝酸盐还原试验阴性，氧化酶试验阳性。 2. 标本采集： 根据病期不同，采集的标本也有所不同。菌血症期病人可采取血液；出现出血点或瘀斑者，可挑取瘀斑渗出液；如出现脑脊髓膜刺激症状者，必要时可抽取脑脊液；上呼吸道感染期的疑似病人和带菌者，可取鼻咽腔分泌物进行检查。因该菌易自溶，故应立即送检，最好在床边接种。 3. 检验方法： （1）直接检查法： 1）脑脊液 以无菌方法获得脑脊液标本后，经3000r/min离心30min，取沉淀物，首先接种培养，然后再涂片染色检查。通常制两张涂片，一张作革兰染色，一张作美蓝染色进行镜检。若脑脊液较清应先增菌，即在脑脊液中加入少量葡萄糖肉汤培养液，经37℃4~6h增菌培养后，再行涂片染色镜检，可提高阳性检出率。一般情况下，患病早期的脑脊液中脑膜炎球菌数量较少，且大多数在细胞外；在疾病后期菌量增大，大多数在细胞内。 2）瘀斑（出血点） 选择细小的色泽鲜红，境界明显的瘀点，或无瘀点时用充血皮肤，经消毒干燥后刺入0.5cm，用清洁玻片采血三滴，涂成血膜片，自然干燥。用美蓝或革兰染色镜检。第一滴血含菌量比第二、三滴血高数倍，故不能按常规采血弃去第一、二滴血。 （2）培养检查法 1）脑脊液 取脑脊液离心沉淀物，立刻接种巧克力平板，37℃，5~8%CO2环境培养18~24h。如脑脊液混浊可直接种入培养基。 2）瘀斑渗出物 渗出物直接涂于巧克力平板上，37℃，5~8%CO2环境培养18~24h。 3）鼻咽腔分泌物 将绵拭标本立即涂于，P.V(Polymyxin B.Vancomycin)卵黄琼脂或P.V巧克力平板一端，再用接种环划线分离，进行培养观察。 4）血液 抽取静脉血5~8ml，立刻接种注入血培养瓶，按血液细菌培养常规操作。 （3）生化反应 取纯培养物，如其形态、菌落特征典型，氧化酶阳性，可按表1进行鉴定。 （4）凝集试验 包括血清凝集试验、SPA协同凝集试验、反向乳胶凝集试验等方法。 （5）荚膜肿胀试验 取一接种环菌掖或脑脊液，于玻片上，再加一环抗血清及二环吕氏美蓝液混合，加上盖玻片，20min，用油镜观察荚膜是否肿胀，同时用盐水作对照。此试验仅适用于A群和C群菌株。 二、淋病奈瑟菌 淋病奈瑟菌（N.gonorrhoeae）简称淋球菌，它是淋病的病原菌。主要通过不洁性交引起泌尿生殖系统化脓性炎症，也可通过污染器械、带菌衣物、用具发生间接污染。也有肛门及咽部的淋球菌感染病例。新生儿经过产道时，可被感染而患淋病性眼结膜炎。 1. 生物学性状： （1）形态与染色 淋球菌的形态与脑膜炎球菌很相似，菌体呈球形、肾形或豆形，成对排列，两球菌接触面平坦，形似一对黄豆。革兰染色阴性，无芽孢、无鞭毛、有荚膜。在急性淋病患者尿道脓汁标本中可见细菌被吞噬于中性粒细胞内；慢性淋病时多在细胞外。 （2）培养特点 本菌对营养要求高，需用巧克力平板，或含万古霉素、多粘菌素及制霉菌素的Thayer-Martin培养基（GC琼脂加生长添加剂）才能生长。初次分离需供给5~8%CO2，最适生长温度为36~37℃，最适pH值为7.5。经48h培养，形成圆形、不透明、