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目录
摘要………………………………………………………………………………………………………………………．I
Abstract……．…………………………………．．……．………………．……………………………………．……．……．III
1引言………………………………………………………………………………………………………………………1
1．1常规转基因动物的制备方法………………………………………………………………．．1
1．1．1
DNA显微注射法………………………………………………………………………．1
1．1．2逆转录病毒载体法………………………………………………………………………2
1．1．3胚胎干细胞介导法………………………………………………………………………2
1．1．4精子载体法………………………………………………………………………………2
1．1．5体细胞核移植法…………………………………………………………………………．3
1．1．6RNAi…………………………………………………………………………………………………………………3
1．1．7基因打靶法………………………………………………………………………………3
1．2精子载体法介导基因转移的研究进展…………………………………………………．4
1．2．1共孵育法…………………………………………………………………………………4
1．2．2电击法……………………………………………………………………………………4
1．2．3 脂质体法…………………………………………………………………………………4
1．2．4睾丸内注射法……………………………………………………………………………。5
1．2．5磁性纳米基因载体转染…………………………………………………………………．5
1．3转基因动物技术的应用……………………………………………………………………6
1．3．1在基础理论方面的应用……………………………………………………………………．6
1．3．2改良动物品种和生产性能………………………………………………………………．．6
1．3．3建立医学动物模型………………………………………………………………………6
1．3．4异种器官移植………………………………………………………………………………．．7
1．3．5作为动物生物反应器……………………………………………………………………．．7
1．4转基因存在的问题与展望…………………………………………………………_………8
1．5CuZnSoD基因的研究进展…………………………………………………………………’8
1．6本研究的目的、意义………………………………………………………………………………．．9
2试验材料…………………………………………………………………………………………。9
2．1试验动物和样品采集…………………………………………………………………………．9
2．2 主要仪器………………………………………………………………………………………．10
2．3主要试剂…………………………………………………………………………………l0
2．4主要数据库及生物软件…………………………………………………………………ll
2．5常用试剂的配制…………………………………………………………………………～11
2．5．1琼脂糖凝胶电泳所用试剂……………………………………………………………1l
2．5．2细菌转化、阳性克隆筛选所用试剂…………………………………………………11
2．5．3蛋白分析用试剂………………………………………………………………………11
3 试验方法…………………………………………………………………………………一12
3．1CuZnSOD基因启动子克隆鉴定及分析………………………………………………．．12
3．1．1引物设计………………………………………………………………………………一12
3．1．2猪基因组提取…………………………………………………………………………．．12
3．1．3
CuZnSOD基因启动子的克隆…………………………………………………………13
3．1．4生物信息学分析………………………………………………………………………13
3．1．6细胞培养及转染………………………………………………………………………一14
3．1．7双荧光素酶活性测定…………………………………………………………………．15
3．1
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