chapter17氨基酸研讨.ppt

（2）测定C端 羧肽酶水解法 在羧肽酶催化下，多肽链中只有C端的氨基酸能逐个断裂下来。 a. 多肽与肼反应 所有的肽键（酰胺键）都与肼反应而断裂成酰肼，只有C端的氨基酸有游离的羧基，不会与肼反应成酰肼。这就是说与肼反应后仍具有游离羧基的氨基酸就是多肽C端的氨基酸。 4．肽链的选择性断裂及鉴定 上述测定多肽结构顺序的方法，对于分子量大的多肽是不适用的。 对于大分子量多肽顺序的测定，是将其多肽用不同的蛋白酶进行部分水解，使之生成二肽、三肽等碎片，再用端基分析法分析个碎片的结构，最后将各碎片在排列顺序上比较并合并，即可推出多肽中氨基酸的顺序。 部分水解法常用的蛋白酶有： 胰蛋白酶——只水解羰基属于赖氨酸、精氨酸(羧基上)的肽键。 糜蛋白酶——水解羰基属于苯丙氨酸、酪氨酸、色氨酸(羧基上)的肽键。 胃蛋白酶——水解氨基属于苯丙氨酸、酪氨酸、色氨酸(氨基上)的肽键 溴化氰———只能断裂羰基属于蛋氨酸的肽键。 例：某八肽完全水解后，经分析氨基酸的组成为：丙、亮、赖、苯丙、脯、丝、酪、缬。 端基分析：N-端 丙……………………亮 C-端。 糜蛋白酶催化水解：分离得到酪氨酸，一种三肽和一种四肽。 用Edman降解分别测定三肽、四肽的顺序，结果为：丙-脯-苯丙；赖-丝-缬-亮。 由上述信息得知，八肽的顺序为： F.Sanger等人花了约10年时间于1953年（35岁）首先测定出牛胰岛素的氨基酸顺序. Sanger获得了1958年（41岁）的诺贝尔化学奖。 此后，有几百种多肽和蛋白质的氨基酸顺序被测定出来，其中包括含333个氨基酸单位的甘油醛-3-磷酸酯脱氢酶。 F. Sanger后来又测定了DNA核苷酸顺序，因而他第二次(1980年62岁)获得了诺贝尔化学奖（同美国人伯格、吉尔伯特共享）。 Frederick. Sanger（ 基因组学之父 ）（1918-2013） 波兰裔法国女物理学家、化学家居里夫人，因发现放射性物质和发现并提炼出镭和钋荣获1903年诺贝尔物理学奖和1911年的化学奖。 美国物理学家巴丁因发明世界上第一支晶体管和提出超导微观理论分获1956和1972年诺贝尔物理学奖。 美国化学家鲍林因为将量子力学应用于化学领域并阐明了化学键的本质、并致力于核武器的国际控制并发起反对核实验运动而荣获1954年的化学奖和1962年的和平奖。 英国生物化学家桑格由于发现胰岛素分子结构和确定核酸的碱基排列顺序及结构而分获1958和1980年的诺贝尔化学奖。 三、多肽的合成 使各种氨基酸按一定的顺序连接起来形成多肽是一向十分复杂的化学工程，要解决许多难题，最主要的是要解决以下四大问题: 1．-NH2或-COOH的保护 氨基酸是多官能团化合物，在按要求形成肽键时，必须将两个官能团中的一个保护起来，留下一个去进行指定的反应，才能达到合成的目的。 对保护基的要求是：易引入，反应后又易除去。 带帽子(保护-NH2) ，穿靴子(保护羧基) 2．活化反应基团（活化-NH2或-COOH） 通常是保护-NH2及-OH、-SH等，活化-COOH（具体方法-略） 多肽的合成必须保证氨基酸的排列顺序与天然多肽相同，并且在物理、化学性质和生物活力各方面与天然多肽都一样，才具有意义。 我国1965年9月发表合成成功牛胰岛素的文章，生物活性1.2~70% 西德……… 7月………………羊………………，…………0.5~10% 美国1967年发表文章 （胰岛素合成方法的改进） 前苏联1972年发表文章 （胰岛素合成方法的改进） 3．生物活性 胰岛素 胰岛素是动物胰臓中分泌的一种激素，能调节碳水化合物的代谢，用于治疗糖尿病，为51肽。 汪猷 1910-1997 （中科院上海有机化学研究所） 邢其毅 1911-2002 （北京大学） 1965年9月，中国在世界上首次合成牛胰岛素。 钮经义 1920-1995 （中科院上海生物化学研究所） 胰岛素是一种激素，可用于治疗糖尿病，但只能用和人体结构相近的胰岛素，如猪胰岛素，其它的则不起疗效。 几种哺乳动物胰岛素的氨基酸顺序的差异： A链（21） B链（30） 8 9 10 30 人 苏 丝 异亮 苏 猪 苏 丝 异亮 丙 牛 丙 丝 缬 丙 马 苏 甘 异亮 丙 1962年, Merrifield(英国人)提出了多肽的固相合成——快速大量合成 17-3 蛋 白 质 分子量在1000以