第八章高效液相色谱法研讨.pptVIP

第8章 高效液相色谱法(HPLC)High Performance Liquid Chromatography ; 高效液相色谱法（HPLC）是20世纪60年代末70年代初发展起来的一种新型分离分析技术。它是在经典液相色谱基础上，引入了气相色谱的理论，在技术上采用了高压泵、高效固定相和高灵敏度检测器，因而具备速度快、效率高、灵敏度高、操作自动化的特点。;1．HPLC与经典液相色谱法的比较 ;原名：High Pressure Liquid Chromatograph（HPLC） 现名：High Performance Liquid Chromatograph（HPLC）;2．HPLC与GC的比较 ;(2)流动相方面： GC采用惰性气体，仅起运载作用。 HPLC中流动相可选用不同极性的液体，流动相对分离起很大作用，相当于增加了一个控制和改进分离条件的参数，为选择最佳分离条件提供了极大方便。;(3)工作温度的要求： GC一般都在较高温度下进行的，而HPLC则经常可在室温条件下工作。 ;气相色谱; 目前HPLC已被广泛应用于分析对生物学和医药上有重大意义的大分子物质，例如蛋白质、核酸、氨基酸、多糖类、植物色素、高聚物、染料及药物等物质的分离和分析。 ;3.高效液相色谱法的特点;高效液相色谱仪的生产厂家; 公司名称????????????????????????? 型号????????????????????????????? 原产地?? 北分瑞利???????????????????????? SY-8100???????????????????????? 北京?? 莱伯泰科（Labtech）LC600/X‘TremeSimple/Ultra-Plus II??????? 北京/美国?? 北京历元?????????????????????UV-200???????????????????????????? 北京?? 创新通恒????????????????????? LC6000???????????????????????????? 北京?? DIONEX(戴安)???????????? SUMMIT/U-3000????????????????????德国?? 杭州科晓化工仪器?????? LC-100???????????????????????????? 杭州?? Jasco??????????????????????????? LC-20????????????????????????????? 日本? 上海精密科学仪器??????? LC200????????????????????????????? 上海?? Thermo TSP（热电）??? C10185????????????????????????????? 美国?? 伍丰???????????????????????????? LC-100????????????????????????????? 上海?? 浙江福立?????????????????????? FL2200????????????????????????????? 浙江 ;13;14;新一代液相色谱∶Alliance; HPLC仪可分为4个主要部分：高压输液系统，进样系统，分离系统和检测系统。此外还配有辅助装置：如梯度淋洗，自动进样及数据处理等。; ;高压输液泵性能要求： ① 流量稳定，精度达1%左右，保留时间与此有关 ② 耐高压，输出压力平稳，脉动小 ③ 流量范围宽，0.1～10ml/min ④ 具有梯度洗脱功能，操作方便 ⑤ 耐腐蚀，泵体易于清洁、维修、保养;2．进样系统 ;要求：密封性、重复性、死体积小、便于自动化 ① 六通阀进样装置：耐磨、密封性好、耐高压、死体积小。;② 自动进样装置 取样、进样、复位、管路清洗、样品盘旋转均自动，进样重复性高，适用于大量样品分析。有圆盘式和链式自动进样器。;3. 分离系统——色谱柱 ;色谱柱使用过程中应注意： （1）不碰撞、弯曲或强烈振动 （2）连接时，勿用力过猛，以不漏为准 （3）样品最好用膜过滤，或萃取、吸附分离大含量杂质 （4）更换流动相时，应选择合适的溶剂冲洗色谱柱，以免流动相相互不溶或盐析出而堵塞柱子 （5）当出现异常的高柱压时，应用适当的溶剂冲洗柱子 ;（6）实验结束，应用适当溶剂冲洗 （7）柱子存放在密封的容器中 （8）适当时对柱子进行再生： 键合相C18柱：用