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大肠杆菌的培养与分离;一、大肠杆菌（E. coli）;细菌的革兰氏染色 ;培养基（culture media）;LB培养基的配方;;固体培养基：菌落;单个或少数细菌在固体培养基上大量繁殖时，就会形成一个肉眼可见的，具有一定形态结构的子细胞群体，叫做菌落。
菌落是鉴定菌种的重要依据。;液体培养基：;无菌操作; （1）消毒：
利用化学或物理方法，杀死大部份致病微生物的过程。;1)消毒：
概念：使用较为温和的物理或化学方法仅杀死物体表面或内部一部分对人体有害的微生物。
方法:
煮沸消毒法
化学药剂消毒:酒精
紫外线消毒
;（2）灭菌;干热灭菌
160－170℃ ；1－2h;高压蒸汽灭菌法;2.请你判断以下材料或用具是否需要消毒或灭菌。如果需要，请选择合适的方法。
（1） 培养细菌用的培养基与培养皿
（2） 玻棒、试管、烧瓶和吸管
（3） 实验操作者的双手;二、大肠杆菌的培养和分离实验操作; （二）倒平板;培养皿壁上不能沾有培养液，否则容易污染。;注意事项：
1.培养基灭菌后，需要冷却到60 ℃左右时，才能用来倒平板
2.灭菌及消毒：无菌操作台用超净紫外灯和过滤风灭菌；桌面及人手用酒精棉球消毒
3.操作时右手无名指和小指夹住封口膜,另外三指持三角瓶,左手拿培养皿并打开上盖的一边,在酒精灯火焰旁操作.
4.需要使锥形瓶的瓶口通过火焰，灼烧灭菌
5.平板冷凝后，要将平板倒置,既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染.
; （三）大肠杆菌的扩大培养;（四）大肠杆菌的划线分离;平板划线分离法;平板划线的操作;不能使用脱脂棉，否则容易吸水，造成污染。;;;;进行恒温培养时，为什么要将平板倒置？;划线分离法注意事项:
1.接种环只蘸一次菌液,但要在培养基不同位置连续划线多次.
2.划线首尾不能相接
3.划线后,培养皿倒置培养12~24h; 1.培养基灭菌后，需要冷却到50 ℃左右时，才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度？;2.在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？;2、涂布分离法:是指将培养的菌液稀释一定的倍数,然后取一定量稀释液加在固体培养基上,用玻璃刮刀涂布在培养基平面上.;划线分离法和涂布分离法哪个更好呢？;课后思考题;1.如何操作才可以尽量避免被杂菌污染?;2.在培养后如何判断是否有杂菌污染?;3.进行恒温培养时为什么要将培养皿倒置?;4.实验完成后,接种过细菌的器皿应如何处理?;5.如果分离的是转基因的大肠杆菌,如何保证不被普通的大肠杆菌所污染?
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