第6章 《细胞培养》复习题及参考答案.docVIP

第6章 《细胞培养》复习题参考答案 一、填空： 1、一般平板培养要求细胞密度每毫升为1x103∽100x103 个。 2、 1.4%琼脂基本培养基+等量细胞培养液=0.7 % 琼脂条件培养基。 3、小细胞团计数方法：①低倍显微镜直接计算；②细胞团显影法。 4、条件培养基是悬浮培养过一段时间组织或细胞的液体培养基。 5、细胞悬浮培养主要应用于 植物有用物质的生产、诱发和筛选突变体、原生质体培养和细胞器分离、食品生产等。 二、名词： 1、看护培养法(nurse culture)：是指用一块活跃生长的愈伤组织块来看护单个细胞，并使其生长和增殖的方法。 2、平板培养法(plante culture)：是把单细胞悬浮液与融化的琼脂培养基均匀混合，平铺一薄层在培养基底上的培养方法。 3、细胞悬浮培养（suspension culture）： 是指将单个游离细胞或小细胞团在液体培养基中进行培养增殖的技术。 4、初始植板密度（inital planting density）：??细胞固体平板培养时，细胞悬浮液接种到琼脂培养基上最初细胞密度。 5、临界密度(critical density)：单细胞培养时，初始植板密度低于某值培养细胞就不能进行分裂和发育成细胞团，则该值就是临界密度。 三、问答题：1、如何得到单细胞无性系？ 在细胞培养中，常由分散性较好的愈伤组织或悬浮培养物来制备单细胞，也可以用纤维素酶和果胶酸酶从植物不同组织直接制备单细胞。 由分离的单细胞经看护培养法、微室培养法或平板培养法，即可得到单细胞无性系 2、单细胞培养有哪些方法？各有何含义及特点 单细胞培养：看护培养；微室培养；平板培养 （1）看护培养法是指用一块活跃生长的愈伤组织块来看护单个细胞，并使其生长和增殖的方法。特点：①简便易行。 ②效果好，易于成功。 ③不能在显微镜下直接观察细胞生长过程。 （2）微室培养：即将细胞培养在很少量的培养基中。 特点：在培养过程中可连续进行显微观察，将一个细胞的生长、分裂和形成细胞团的全部过程记录下来。 （3）平板培养法是把单细胞悬浮液与融化的琼脂培养基均匀混合，平铺一薄层在培养基底上的培养方法。特点：可以定点观察；分离单细胞系比液体浅层培养容易；培养细胞气体交换不畅。 3、说明每一种单细胞培养方法的要点？ （1）看护培养： ①小三角瓶中加1cm厚的固体培养基，灭菌 ②将1cm大小的愈伤组织块放在培养基中央。 ③在愈伤组织块上放1cm2无菌滤纸片，培养室中过夜 ④将单个细胞接种在滤纸上面 ⑤培养室培养f1个月可见愈伤组织小块，2-3个月得到单细胞无性繁殖系。 （2）微室培养： ①载玻片和盖玻片火焰上消毒 ②在载玻片上涂一圈四环素眼膏，放一小段毛细管。滴一小滴细胞悬浮液于凹穴中 ③盖上盖玻片，使之与悬浮液接触 （3）平板培养： ①制备单细胞悬浮液：用酶法或机械震荡法将组织器官游离出单细胞。经过滤后的滤液即是。 ②悬浮液密度的调制： a通过显微镜，观察记数板凹槽中的悬浮液细胞数，并计算其密度。 b一般平板培养要求细胞密度为1′103-1′105。 ③培养基的配制：1）1.4%琼脂培养基; 2)0.7%琼脂的条件培养基。 ④平板制作：按1:2或1:4混合，制成3mm厚的平板。 ⑤培养：26°C暗培养21d，计算细胞团数，计算植板率 4、什么是植板率？小细胞团的计数方法有哪几种？ 植板率是指已形成细胞团的单细胞与接种总细胞数的百分数。 小细胞团计数方法：①低倍显微镜直接计算； ②细胞团显影法 5、什么是细胞悬浮培养？简述成批培养和连续培养的的特点？ 细胞悬浮培养：是使离体的植物细胞悬浮在液体培养基中进行的无菌培养。 （1）成批培养的特点： ①细胞生长在固定体积的培养基上，直至养分耗尽 ②用搅拌的方法使细胞团和细胞均匀分布 ③细胞数目呈现慢—快—慢—停止生长的变化d必须更换新鲜培养基才能进行下一批培养 （2）连续培养的特点： ①由于不断加入新鲜培养基，保证了养分的充分供应，不会出现悬浮培养物发生营养不足的现象 ②可在培养期间使细胞保持在对数生长期中。细胞增殖速度快 ③适于大规模工业化生产 6、说明细胞在连续培养中，细胞数目会发生什么变化？ 在整个培养过程中，细胞数目不断发生变化，呈现出明显的由慢到快，再到慢，最后增长停止的细胞周期。细胞的生长呈S型曲线 ①延迟期：细胞很少分裂 ②对数生长期：细胞分裂活跃，细胞数目增加，增长速率保持不变 ③直线生长期细胞生长和发育最明显的时期 ④缓慢期生长逐渐缓慢：培养液消耗将尽，有毒代谢物质增多，氧气减少 ⑤静止期生长几乎处于停止状态，细胞数目增加极少，甚至开始死亡