九、核糖体提取.pptVIP

第九章 核糖体(ribosome) ;第一节 核糖体的类型与结构;在真核细胞中, 核糖体进行蛋白质合成时，既可以游离在细胞质中, 称为游离核糖体, 也可以附着在内质网的表面, 称为膜旁核糖体或附着核糖体。 真核细胞含有较多的核糖体, 每个细胞平均有106 ～107 个, 而原核细胞中核糖体较少每个细胞平均只有15×102 ～18×103 个。;典型的原核生物大肠杆菌核糖体是由50S大亚基和30S小亚基组成的。在完整的核糖体中，rRNA约占2/3, 蛋白质约为1/3。50S大亚基含有34种不同的蛋白质和两种RNA分子，相对分子质量大的rRNA的沉降系数为23S，相对分子质量小的rRNA为5S。30S小亚基含有21种蛋白质和一个16S的rRNA分子。 真核细胞核糖体的沉降系数为80S，大亚基为60S，小亚基为40S。在大亚基中，有大约49种蛋白质，另外有三种rRNA∶28S rRNA、5S rRNA和5.8S rRNA。小亚基含有大约33种蛋白质，一种18S的rRNA。 ;核糖体是细??内一种核糖核蛋白颗粒, 其惟一功能是按照mRNA的指令将氨基酸合成蛋白质多肽链, 是细胞内蛋白质合成的分子机器。随着分子生物学的发展，核糖体概念的涵意有了进一步的发展。 细胞内除了从事蛋白质合成的核糖体外，还有许多其它功能的核糖核蛋白体颗粒，通常是一些小分子的RNA同蛋白质组成的颗粒，它们参与RNA的加工、RNA的编辑、基因表达的调控等。;一、核糖体的基本类型与成分;?主要成分 ?r蛋白质：40%，核糖体表面 ?rRNA:60%，核糖体内部 ?核糖体的分布 常分布于蛋白质合成旺盛的区域，其数量与蛋白质合成程度有关。 ?核糖体的大小亚单位在细胞内常常游离于细胞质基质中，只有当小亚单位与mRNA结合后，大亚单位才与小亚单位结合形成完整的核糖体。肽链合称终止后，小亚单位解离，又游离存在于细胞质基质中。;?各种来源的核糖体亚基组成;核糖体的生物发生(biogenesis) 核糖体的合成和装配过程相当复杂。真核细胞和原核细胞的核糖体合成和装配过程各不相同。核糖体的生物发生包括蛋白质和rRNA的合成、核糖体亚基的组装等。? 核糖体rRNA基因的转录与加工 核糖体的组成成分是蛋白质和rRNA，所以编码核糖体的基因分为两类，一类是蛋白质基因，另一类是rRNA基因。在生活细胞中，特别是在活跃进行蛋白质合成的细胞中，需要大量的核糖体，这就意味着需要合成大量的rRNA和核糖体蛋白质。? ;■编码rRNA基因的过量扩增 细胞为了满足大量需求的rRNA，通过两种方式扩大rRNA基因的拷贝数： ●在染色体上增加rRNA基因的拷贝数，如在细菌E.coli的基因组中有七套rRNA基因，而典型的真核生物细胞含有几百到几千个28S、18S和5.8S rRNA基因的拷贝，5S rRNA基因的拷贝数多达50000个。 ●通过基因扩增(gene amplification)。科学家用两栖类的卵细胞(卵母细胞)研究在发育过程中rRNA基因的扩增。发现两栖类卵母细胞在发育的早期，rRNA基因的数量扩增到1000多倍。;■真核生物18S、5.8S、28S rRNA和5SrRNA基因 编码rRNA基因的DNA称为rDNA。 真核生物有四种rRNA基因, 其中18S、5.8S和28S rRNA基因是串联在一起的,每个基因被间隔区隔开, 5S rRNA基因则位于不同染色体上。 ■18S、5.8S、28S rRNA基因转录与加工 18S rRNA、5.8S rRNA和28S rRNA基因首先转录成一个45S的前体rRNA(pre-rRNA)，大约是这3 个rRNA总长的2倍。能够转录这3个rRNA前体的DNA区域称为一个转录单位，意指它们有一个共同的转录起点和转录终点。;●转录酶: 真核生物中参与rRNA基因转录的酶是RNA聚合酶Ⅰ。 ●前体加工 前体rRNA在核仁中被酶剪切成3个rRNA产物，转录间隔区则被降解掉。 根据3H标记的尿嘧啶和放线菌素D研究人的培养细胞前体rRNA的合成的结果推测了前体rRNA的加工过程。 ;;核输入与核输出;■5S rRNA基因的转录与加工 5S rRNA是核糖体大亚基的一个组份，原核生物和真核生物都有5S rRNA，而且结构相似。 ●5S rRNA基因: 真核生物的5S rRNA基因与其他三种rRNA基因不在同一条染色体上，它是由核仁以外的染色体基因转录的，然后运输到核仁内参与核糖体的装配。 ;二、核糖体蛋白质与rRNA的功能分析;核糖体的功能位点 原核生物核糖体中有四种与RNA分子结合的位点，其中一个是与mRNA结合的位点，另三个是与tRNA结合的位点。 A位点(A site) P位点(P site)