4-第8章分子发光法资料.ppt

第4章（课本第8章）分子发光分析法;一、分子发光分析法类型 分子发光分析法以分子发光作为检测手段的分析方法，包括荧光分析法、磷光分析法和化学发光分析法。 光致发光(分子荧光和磷光):分子吸收光能被激发所产生的光。 化学发光:由化学反应的化学能所激发产生的光。 生物发光:由生物体体内化学反应释放出来的能量所激发产生的光。;灵敏度高。比吸收光度法一般要高2 ~ 3个数量级。 选择性比较高。物质对光的吸收具有普遍性，但吸光后并非都有发光现象。即便都有发光现象，但在吸收波长和发射波长方面不尽相同，这样就有可能通过调节激发波长和发射波长来达到选择性测定的目的。 样品量小，操作简便，工作曲线的动态线性范围宽。 发光分析法在光学传感器以及在生物医学、药学和环境科学等方面的应用显示了它的优越性。 ;一、基本原理;2. 激发态→基态的能量传递途径;;非辐射能量传递过程 振动弛豫 -在同一电子能级中，电子由高振动能级转至低振动能级，将多余的能量以热的形式发出，时间约为10-5s。 内转移-当两个电子能级有重叠时，电子由高能级以无辐射跃迁方式转移至低能级． 系间窜跃 -多重态间的无辐射跃迁． 外转换：激发分子与溶剂或其他分子之间相互作用而转移能量的非辐射跃迁。;荧光发射: 处于第一激发单重态中的电子跃回至基态各振动能级时，得到最大波长与吸收的光辐射不同的荧光． 10-7～10 -9 s. 磷光发射:处于第一激发三重态最低振动能级的电子跃回至基态时，发射磷光。 10-4～10s 电子由基态单重态激发至第一激发三重态的几率很小-禁阻跃迁． 磷光发射过程：由第一激发单重态的最低振动能级，以系间窜跃方式转至第一激发三重态，经过振动弛豫转至其最低振动能级，跃回至基态时便发射磷光。;3、荧光/磷光光谱曲线;4. 荧光、磷光与分子结构的关系 A. 产生荧光的必备条件 （1）具有合适的结构； （2）具有一定的荧光量子产率。 ;B.化合物的结构与荧光;大的共轭? 键结构 形成刚性平面结构 取代基团为给电子取代基;（1）大的共轭? 键结构;（2）刚性平面结构;?F ?1;例 3 偶氮苯与杂氮菲 ;例4 荧光衍生物;给电子基团-增强荧光； 吸电子基团-减弱荧光； 卤素原子因重原子效应而减弱荧光. 空间结构及存在环境对荧光也有不同影响. ;给电子取代基 增强荧光;芳环上有 给电子基，使荧光增强。;吸电子取代基，减弱荧光;（4）金属及金属螯合物;金属螯合物：产生/增强荧光;例 ：金属配合物;5. 激发光谱与发射光谱的关系;;荧光三维谱图;6、荧光强度与溶液浓度的关系（定量分析）;7. 荧光的猝灭;8.影响荧光强度的环境因素;（4）表面活性剂 表面活性剂的存在，可以保护激发单重态的荧光物质分子，减小非辐射跃迁的概率，提高荧光效率。 （5）顺磁性物质 顺磁性物质（如O2）会使激发单重态的荧光物质分子向三重态的体系间窜跃速率加大，降低荧光效率。 （6）溶液荧光的猝灭 激发分子与溶剂分子或其它溶质分子的相互作用，使能量转移，荧光强度减弱甚至消失。 ;主要组成部件;LS -55荧光/磷光/发光分光光度计;LS -55荧光/磷光/发光分光光度计;F-2500型荧光光谱仪;1.直接定量法;2. 间接测定法—猝灭荧光法 被分析物本身不发荧光，或者因荧光量子产率太低而无法进行直接测定，便只能采用间接测定的办法。如：光衍生法、荧光猝灭法、敏化荧光法等;四、荧光分析法的应用;§4.2 分子荧光与磷光光谱分析法;§4.2 分子荧光与磷光光谱分析法;*五、磷光的测定方法;*2. 室温磷光分析 固态基质表面室温磷光分析：分析物通过物理吸附或某种化学作用力被束缚在固体基质表面，增大了刚性，减小了碰撞失活的概率，在严格干燥试样的情况下限制了氧的猝灭作用，显示室温磷光。 胶束稳定的室温磷光分析：磷光体进入表面活性剂的胶束溶液中，微环境和定向约束力发生变化，减小内转化和碰撞能量损失等非辐射失活过程概率，明显增大三重态的稳定性，使磷光强度显著增大。 敏化室温磷光分析;*六、磷光分析法的应用;§4.2 分子荧光与磷光光谱分析法;§4.2 分子荧光与磷光光谱分析法;*七、磷光分析仪器;化学发光是由化学反应提供的能量激发物质所产生的光辐射。 化学发光分析法基于化学发光现象的分析方法。 化学发光反应存在于生物体(萤火虫、海洋发光生物)中，称生物发光(bioluminescence)。 优点：(1). 灵敏度很高。(2). 仪器设备简单，无须光源和单色器，因而也消除了散射光和杂散光的干扰；(3). 线性范围宽；(4). 分析速度快。 局限：目前可供的发光体系尚有限，发光机理有待进一步研究，