细胞培养基础大全.ppt

细胞培养准备;一、无菌实验室;二、实验室常用设备使用;压力蒸汽消毒器;干燥箱;水纯化装置;;蒸馏水器、压力蒸气消毒器和电热干燥箱都是属于大功率电器，使用时一定要注意用电安全，尽量做到分开时间使用。;超净工作台;CO2培养箱;CO2供气凋节方法;倒置显微镜;离心机;电子分析天平;冰箱;细胞冷冻储存器;酸度计 ;酶标仪;特殊设备;三、细胞培养需要的物品：;;;;;1、清洗 2、浸酸： 玻璃器皿浸泡到清洁液中 浸泡时间：一般为过夜，不应少于6 小时 清洁液 常用三种：重铬酸钾（g）浓硫酸（ml）蒸馏水（ml） 强清洁液 63∶1000∶200 次强清洗液 120∶ 200∶1000 弱清洁液 100∶ 100∶1000 需流水冲洗十次以上，每次水须灌满及倒干净;3、消毒;;配液前准备：;平衡盐液体（Balanced salt solution, BSS）;消化液——分散组织、细胞;特点： 1、胰蛋白酶的活力用解离酪蛋白的能力来表示，??用的有1：125和1：250两种。 2、许多学者认为钙、镁离子和血清的存在都会降低胰蛋白酶的活力。消化细胞时，加入一些血清（10%）或含血清的培养液，能终止消化作用。;称取胰蛋白酶粉末置烧杯中，用少许或PBS溶液调成糊状，再补足PBS，搅拌混匀，置室温4 小时或冰箱过夜，不断搅拌振荡 次日，过滤除菌，分装入瓶中， -20℃保存备用（以免分解失效），常用浓度为0.25% （0.1%-0.5%）。 如果短期内要使用，就放置4℃冰箱。; 抗生素溶液 通常是青霉素和链霉素联合使用，俗称“双抗溶液”。 青霉素主要是对革兰阳性菌有效，链霉素主要对革兰阴性菌有效。加入这两种抗生素可预防绝大多数细菌污染。 培养基内青霉素、链霉素最终使用浓度为每毫升100单位。 一般市售市售链霉素为100万U/瓶;培养基;市场上可提供干粉培养基和液体培养基 干粉培养基需使用者自己配制并灭菌，其优点是价格便宜。缺点是配制过程繁琐，质量不易控制，配制时需要补加NaHCO3，调PH。配制好后，用过滤法消毒除菌，采用0.22μm。分装于玻璃瓶中，使用时再加血清。 液体培养基是由专业厂家按标准规模化生产，不仅质量得到保证，而且使用十分方便;根据包装袋上的要求和实验需要补加NaHCO3和谷氨酰胺。 加抗生素： 上述溶液配制好后，用过滤法消毒除菌，采用0.22μm。分装于玻璃瓶中，使用时再加血清。;大多数培养液中使用酚红作为pH 指示 红色表示中性pH，黄色代表酸性pH，紫色表示碱性pH;四、灭活胎牛血清（FBS）与分装过程：;牛血清分装：