细胞游离亚铁原卟啉检测技术资料.ppt

细胞游离亚铁原卟啉 检测技术 作者：温鑫 ; 细胞游离亚铁原卟啉（Cells Free Ferrous Protoporphyrin FH）是恶性肿瘤发生过程中产生的因果性生物标志因子。 FH是含亚铁原卟啉蛋白的分解产物。 FH具有强氧化作用，导致细胞自稳调节功能紊乱。 FH含量具有连续可测量性，且与细胞癌变程度呈密切正相关。采用直接生物学介质（组织渗液）进行靶向定位检测，即可显示细胞恶变过程。; 细胞游离亚铁原卟啉 （FH） 主要来源 线粒体 ;膜间腔;; ; 线粒体内含亚铁原卟啉的蛋白主要包括： 铁硫蛋白、辅酶Q、细胞色素等； ATP合酶、过氧化氢酶、过氧化物酶、单胺氧化酶、血红素加氧酶 、 NAD（P）H氧化酶、鸟氨酸氧化酶、一氧化氮合成酶、腺苷酸激酶、细胞色素氧化酶、苹果酸还原酶等120余种酶类。 ; 在病理情况下，亚铁原卟啉从细胞蛋白析出，成为细胞游离亚铁原卟啉，不仅没有生物学功能，反而能引起细胞和组织器官的氧化损伤。 ; 细胞游离亚铁原卟啉 （FH） 生成机制 【细胞能量代谢重编程】 ;ATP ; 糖 ; ; 诺贝尔奖获得者德国生物化学家奥托.海因里希.瓦博格（Otto Heinnich Warburg ）发现肿瘤细胞的耗糖速度是正常细胞的10倍，却仅产生1/10的能量。肿瘤细胞主要通过磷酸戊糖途径产能，使即便在有氧情况下有氧氧化过程也不能对糖酵解产生抑制，这称为瓦博格氏效应（Warburg effect）。; 以6-磷酸葡萄糖开始，在6-磷酸葡萄糖脱氢酶催化下形成6-磷酸葡萄糖酸，进而代谢生成以磷酸戊糖为中间代谢物的过程，称为磷酸戊糖途径，简称PPP途径。 反应部位：胞浆 重要反应产物：NADPH、5-磷酸核糖 限速酶（启动因子）：6-磷酸葡萄糖脱氢酶; 6-磷酸葡萄糖脱氢酶的活性与抑癌基因p53有关。p53基因因编码一种分子质量为53kDa的蛋白质而得名，是一种抑癌基因。一旦p53基因发生突变，P53蛋白失活，细胞分裂失去节制，发生癌变。 ; 在正常情况下,p53与葡萄糖-6-磷酸脱氢酶相结合,抑制它的活性，阻止磷酸戊糖途径进行,细胞中的葡萄糖主要通过三羧酸循环产生能量。 ; 在p53发生突变或缺失的肿瘤细胞中,失去了对葡萄糖-6-磷酸脱氢酶的抑制,该酶作为戊糖磷酸途径的启动因子，使葡萄糖通过戊糖磷酸途径代谢。 1、耗能； 2、产生大量还原型辅酶Ⅱ（NADPH）,进行生物合成； 3、改变细胞微环境。 ;致癌因素; Warburg 效应形成的细胞微环境紊乱 低氧（氧稳态紊乱） 酸性环境（酸碱平衡紊乱） 还原性状态（氧化-还原平衡紊乱） ; FH位于细胞含亚铁原卟啉蛋白的肽链靠近表面的一个疏水核内，它主要依靠Fe2+与F8His的咪唑氮配位而挂在Pr链上。但是它之所以能固定在蛋白质的固定位置上而且取向一定，主要是因为还有大约21个残基逼近FH，距离在4A°之内，这些残基中有60多处与FH比较靠近，可以发生极性与非极性的相互作用，足以保持FH在细胞蛋白中的位置。; FH的极性部分丙酸基侧链伸向亲水的表面，在生理pH下解离成负离子，在α链中，有一个丙酸基与CD3His相连；在β链中，FH的两个丙酸基分别与CD3Ser和E10Lys相连。FH与肽链之间的静电引力对于维持FH在细胞含亚铁原卟啉蛋白中的位置有很大作用。 ; 谷胱甘肽过氧化物酶以还原型谷胱甘肽(GSH)作为供氢体来分解H2O2，生成氧化型谷胱甘肽(GSSG)，使细胞内GSH:GSSG的比率下降。GSH生成GSSG过程中形成肿瘤细胞的低氧状态，激活氧感受器和缺氧信号传导通路。 ; FH的极性部分丙酸基侧链伸向亲水的表面，在生理pH下解离成负离子，在α链中，有一个丙酸基与CD3His相连；在β链中，FH的两个丙酸基分别与CD3Ser和E10Lys相连。FH与肽链之间的静电引力对于维持FH在细胞含亚铁原卟啉蛋白中的位置有很大作用。 ; 氧感受器分子导致蛋白质的巯基由氧化型向还原型转变，促使缺氧特异性转录因子-低氧诱导因子（hypoxia-inducible factor；HIF ） HIF-1a的磷酸化并与HIF-1b结合而形成