3.5微生物药物的发酵生产技术课件.pptVIP

第二章 微生物制药;一、微生物药物的几个相关基本概念 二、微生物药物的分类 三、微生物药物的应用 四、药源微生物及微生物药物的筛选技术 五、微生物药物的发酵生产技术 六、微生物药物的分离、精制和鉴别 七、废弃物的综合利用和环境保护;五、微生物药物的发酵生产技术;（一）微生物药物工业生产菌种;1、药物生产菌株;工业生产菌株应满足的要求： 能够产生较高浓度的目标产物； 微生物药物工业发酵中高浓度产物一般是胞外产物； 产物便于分离提取； 能利用易得廉价原料，如淀粉、糖蜜、甲醇和纤维素物质等； 不致病，不产生内毒素； 发热量低，需氧低，具备适中的发酵温度和细胞形态，即发酵条件较温和； 容易进行代谢调控。;（1）产生菌株的筛选 直接从国内外的各种非盈利的微生物菌种保藏中心购买 生产菌株的改良——重组DNA技术和常规诱变筛选的结合;（2）生产菌株的纯化 不断纯化高产性状的菌株 筛选遗传上稳定的菌株;（3）理化诱变及筛选 细胞的准备 诱变剂的选择 诱变处理的效率 突变株的分离;（4）生产菌株基因重组改良 自然繁育系统 原生质体融合 基因工程;2、生产种子的制备;（1）生产菌种的保藏制备 基本原则： 低营养 干燥 缺氧 低温 密封;（2）实验室种子制备 斜面菌种制备 短期存放 斜面菌种要求丰富的孢子和营养菌体细胞 斜面应软硬适中，光滑，表面无游离水，无污染，斜面长不超过试管2/3。 制备好的斜面菌种要求无污染，外观生长均匀，孢子或菌体丰满，无杂菌杂色等。;米孢子的制备 质量要求：无污染，孢子数足，发芽率高，生产能力稳定。 影响米孢子质量的因素： 米的质量——用优质品种、新米； 米的湿度——以灭菌后不结块为准； 营养液成分;大米/小米;摇瓶种子的制备 摇瓶种子提供的通常是丰富的营养菌体细胞。要求无污染、生产力高、菌体浓度高、处于生长阶段。 要求培养基组成丰富而均衡， 控制液体装瓶量，一般：40-50 ml/250ml，60-80 ml/500ml，80-100 ml/750ml;（3）种子罐种子的制备;生产现场，一级种子罐用火圈法或压力差法接种，二、三、四级种子罐用压力差法接种。 一般种子罐之间的接种量在5%-10%，种子罐到发酵罐之间的接种量可以控制在20%-30%。 种子罐的控制内容包括细胞代谢状态、发酵液中的残糖和氨氮含量、pH变化、细胞的呼吸活性等。 为了菌体细胞进入发酵罐后能很快的适应发酵培养基条件，应该在最后一级种子罐配料上加入适当的发酵培养基条件，如pH、消泡剂。;3、药物生产菌的生长和产物合成;（1）药物产生菌的营养需求和培养基配制;培养基配制中常用的组分;在发酵培养基设计中，一般先用合成成分鉴别特殊需要，再转为天然培养基，以扩大生产。 在发酵培养基成分选择是，除传统营养外，可选用各种农副产品、工业副产品、废料等。 开发天然培养基时，应考虑： 新选微生物及其工艺的特殊营养需求； 为保持培养基成分稳定，改善储藏条件和加工条件； 原料的性质及配制、灭菌、发酵条件对产物提取的影响； 培养基价格。;（2）影响微生物生长和产物合成的环境因子;微生物药物发酵生产不同时期对基质的要求;（3）微生物次级代谢产物发酵生产的优化和控制;;条件优化过程的三个阶段 摇瓶发酵 小规模发酵实验 工艺放大;4、药物的发酵技术;（2）补料分批发酵 也称半连续发酵，是指在分批发酵过程中，间歇的补加有限制性营养物的一种与分批发酵相似的发酵方法。 与传统分批发酵相比有以下优点： a)发酵系统维持较低的基质浓度，以除去快速利用基质的 阻遏效应； b)维持适当的菌体浓度，不至于加剧供氧矛盾； c)延长次级代谢产物的生产时间； d)避免培养基中积累某些有毒代谢物抑制菌体生长。;（3）生产过程及参数控制;5、几种重要抗生素的发酵工艺;In 1928, Alexander Fleming ( left), a Scottish bacteriologist, discovered a mold with bacteria-killing powers so incredible it was effective even when diluted 800 times. Courtesy of the USDA. Right, a strain of P. notatum was used for some of the first tests of pencillin. Courtesy of the FDA’s Center for Drug Evaluation and Research. ;甘油、葡萄糖和蛋白胨组成的培养基斜面培养;大规模发酵生产;发酵的影响因素及控制;前体的影响和控制：;pH的影响和控制