6HPLC仪的保养新课件.pptVIP

黑龙江省药检所 姜连阁 Jiangliange @;分离原理;各种液相色谱法的比较;主要HPLC方法的特性 ;主要HPLC方法的特性;分离选择性;;(一)溶剂强度的影响;改变溶剂强度控制样品保留;;峰形不佳对积分准确度的影响;首选的实验条件;流动相;流动相 ;甲醇、乙腈作流动相溶剂时的分离选择性差异;pH对峰形的影响;反相色谱pH对保留的影响;?有峰形差的可能性(程度与填料品牌相关)?需要精密控制pH以获得良好的色谱重现性;pH对保留因子的影响;缓冲容量，UV吸收值，溶解度、稳定性、与样品和/或色谱柱的相互作用、挥发性、对HPLC系统的腐蚀等;碱性化合物和金属螯合物的峰形解决方法;对HPLC色谱柱的要求 ;硅胶反相C18填料选择性差异来源;低pH可能导致分离度降低或根本不能分离;;;固定相配基类型发生改变时，分离选择性有显著变化。苯基柱对的保留能力比在C18柱上还要强。一般对含有苯环的物质选择性好 ;不同基体C18柱间的分离选择性差异;;、;有关物质 方法建立;有关物质 方法建立;有关物质系统适用性指标;固定相的选择和确定;;;二、流动相的选择与优化;;三、样品液浓度的选择;四、波长的选择;;方法专属性验证;;;制剂;1、辅料峰的定位（耐用性）。 2、证实在扣除辅料峰的记录时间段内无杂质峰（将主成分的原料药进行降解测定）。 3、利用辅料与主药的溶解性差异，将辅料峰降至最小的干扰，以便可忽略不计。;六、保留时间的确定;制剂要验证确保各降解物、辅料峰均在规定的保留时间倍数内出峰（进行不同品牌柱子的比较) 因某个主要杂质出峰过缓而使保留时间延长到5倍以上时，应考虑采用梯度洗脱，将记录时间缩短，保证杂质峰的峰型和检出灵敏度。;七、溶液的稳定性考察;如果不能在长时间内稳定，但在较短的时间（起码能在此时间内完成实验的全过程）是稳定的，应在标准上注明操作时间的限度。;1有关物质检查项的标准复核中遇到的几个问题及处理方法： 1，????????? 照搬国外药典的检验方法 ①?? 色谱条件、一般杂质、特定杂质、特定杂质的相对保留时间和校正因子以及限度完全一致。 ②?? 色谱条件、一般杂质???度一致。 ③?? 色谱条件不一致、一般杂质、特定杂质限度完全一致。 ④?? 色谱条件一致，一般杂质、特定杂质不同或限度不一致。 ; 2，更改已有国标的方法 ①?? ＴＬＣ法改为ＨＰＬＣ法 ②?? 特定杂质的ＨＰＬＣ外标法改为ＨＰＬＣ自身对照法 ;3，复方制剂有关物质的检验方法①?? 只进行其中某一成分的杂质检查②?? 在一个色谱条件下按出峰时间段对两个成分的杂志分别进行自身对照法测定③?? 在一个色谱条件下对总杂质按其中一个成分的峰面积进行自身对照法测定④?? 在一个色谱条件下对总杂质按两个成分的平均峰面积进行自身对照法测定;4，异构体的检验方法①?? 用相应的异构体的对照品的外标法（或用相应的异构体的对照品定位采用归一化法）②?? 用消旋体的对照品的外标法（或有相应的消旋体的对照品定位采用归一化法）③?? 采用相对保留时间或以出峰次序定位的归一化法;耐用性 高效液相色谱法;５，对一个成分有两个色谱峰的检验方法及限度的确定的讨论 ;HPLC仪的保养;HPLC仪对环境的要求：;HPLC组成;;流动相应注意的问题：;;常用反相流动相组分的UV值与波长的关系;由于甲醇的极限波长为210nm左右，故短波长测定时，最好不要采用甲醇，而用乙腈。 样品稀释用溶剂的选择：测定有关物质时最好选用流动相，避免以溶剂峰的干扰，水往往出倒峰。含量测定时，溶剂依情况而定，有时选用流动相费用太高，或是不易于操作。 进样量最好选用定量环的量，以避免由于进样不准而引起的偏差。定量环可进行更换;;泵的保养：;1 选择好填充柱 2 ，避免冲撞击；减小压力波动 3 用保护柱和在线过滤片 4 经常用强溶剂冲洗柱子：反相用1:1的异丙醇/氯仿，正相用甲醇 5 样品预处理，尽量减少无谓的强滞留成分和微粒 6 用较柔和的pH值3－7 ；防止键和相的流失 7 储存时冲洗掉盐缓冲液，以纯乙腈保存柱，避免高浓度的水和醇类;紫外灯的保养：; 液相色谱常见故障;保留时间缩短或延迟;出现肩峰或分叉;鬼峰;基线噪声