Fgl2基因过表达对自身免疫性心肌炎大鼠心功能及相关炎症因子影响的研究.pdfVIP

摘要 摘 要 目的： 本研究旨在建立慢病毒介导凝血酶原（Fibrinogen-like protein2，Fgl2）基因 过表达自身免疫性心肌炎大鼠模型。探讨 Fgl2 基因过表达对自身免疫性心肌炎 大鼠心功能及相关炎症因子水平的影响。 方法： 雄性 Lewis 大鼠 32 只，体重 190-210g，随机分为 4 组。①Fgl2 慢病毒过表 达自身免疫性心肌炎组 8 只：对大鼠诱导免疫性心肌炎模型的同一天，以 5x107IU/只的量尾静脉注射 Fgl2 过表达慢病毒载体。②空载体（GFP）自身免疫 性心肌炎组 8 只：对大鼠诱导免疫性心肌炎模型的同一天，以 5x107IU/只的量尾 静脉注射 GFP 慢病毒载体。③自身免疫性心肌炎组 8 只。④正常组 8 只。自然 光照，普通饲料喂养，自由进水。第 60 天，将大鼠先剃去胸部鼠毛后麻醉，麻 醉后检测大鼠的左室短轴缩短率（LVFS），然后计算其左室射血分数（LVEF）， 记录其心率（HR）。处死老鼠后开胸,提取右房静脉血，分离血清，用于检测血 清脑钠肽、肿瘤坏死因子 α、白细胞介素 6、白细胞介素 17（BNP、TNF-α、IL-6、 IL-17）。取出心脏，使用生理盐水进行冲洗；水平面切开，将心脏分为心房及心 室两部分，其中心底部分进行甲醛固定，切片，进行 HE 染色后观察其病理形态， 心室部分进行冰冻切片，荧光显微镜下观察带荧光病毒转染情况，提取心肌组织 总蛋白，Werstern blot 检测 Fgl2 蛋白表达。 结果： （1）自身免疫性心肌炎组与正常组大鼠组的饮食饮水量和活动量对比，其 饮食量和饮水量明显减少； （2）荧光显微镜检测：Fgl2 基因过表达自身免疫性心肌炎组，荧光显微镜 下观察血管壁及心肌细胞间血管内壁可见绿色荧光； （3）荧光定量 PCR 检测 Fgl2 基因 mRNA 表达情况，可发现 Fgl2 基因过表 达自身免疫性心肌炎???高于其他 3 组，而空载体自身免疫性心肌炎组和自身免疫 性心肌炎组两者之间无明显差异，但高于正常对照组； （4）Western blot 检测 Fgl2 目的基因蛋白表达：对比于正常组相比，自身免 疫性心肌炎组与 GFP 空载体组 Fgl2 蛋白表达高于正常组，但两组之间无明显差 II 万方数据 摘要 异；Fgl2 基因过表达自身免疫性心肌炎组较自身免疫性心肌炎组 Fgl2 蛋白表达更 高； （5）心肌切片 HE 染色：在光镜下正常组大鼠心肌细胞的胞体, 胞核大小一 致, 胞浆染色均匀，其心肌纤维走行整齐；自身免疫性心肌炎及空载体自身免疫 性心肌炎组表现为心内膜下小灶性坏死；Fgl2 过表达自身免疫性心肌炎组可见左 右心室外膜大面积坏死，室间膈广泛性心肌坏死，纤维细胞增生，可见大量中性 粒细胞、噬酸性细胞 ； （6）大鼠心功能检测：对比于正常组，Fgl2 基因过表达自身免疫性心肌炎 组的 LVFS、LVEF 及 HR 均降低，差异有