亚硒酸钠对增生性瘢痕成纤维细胞增殖的影响及其机制研究.pdf

摘要 摘 要 目的： 观察亚硒酸钠对人增生性瘢痕（Hypertrophic Scar，HS）成纤维细胞 （Fibroblast，FB）体外增殖的影响，并进一步研究经亚硒酸钠作用后的 FB 中 转化生长因子-β1（Transforming Growth Factor beta-1，TGF-β1）和Ⅰ、Ⅲ型胶原 表达的变化；探讨在亚硒酸钠作用 FB 过程中 Wnt/β-catenin 信号通路的变化，从 而证明亚硒酸钠抑制 HS 中 FB 增殖的可能作用机制。 方法： （1）HS 组织取自本院整形科患者，采用改良组织块联合胰酶消化法体外培养 FB；（2）取 第 4 代 FB 用 CCK-8 试剂检测经过不同浓度（0 umol/L 、2.5umol/L、 5 umol/L、10 umol/L、20 umol/L、40 umol/L、80 umol/L）的亚硒酸钠培养基培 养 24h、48h、72h、96h 之后各组 FB 的增殖情况；同等条件下，用 Live/dead 试 剂盒检测加入不同浓度的亚硒酸钠培养基培养 24h 之后在荧光显微镜下观察各 组 FB 生长情况；细胞免疫组化法检测加入上述不同浓度的亚硒酸钠培养基培养 24 小时后各组 FB 内 TGF-β1 和Ⅰ、Ⅲ型胶原，Wnt-1 和 β-catenin 蛋白的表达情 况；采用蛋白免疫印迹法检测加入上述不同浓度的亚硒酸钠培养基培养 24 小时 后各组 FB 内 Wnt-1 和 β-catenin 蛋白的表达情况，以上实验均重复三次；（3） 日本大耳白兔 8 只，建立兔耳 HS 的动物模型，每只兔子每只耳朵上分别建立 6 个 1.0cmx1.0cm 创面，28 天后取已形成的 60 个 HS 创面随机分为三组：A：生 理盐水组，B：0.1mg/ml 醋酸曲安奈德组，C：20umol/L（考虑亚硒酸钠的毒性 作用，本次选取一个相对安全适中的浓度）亚硒酸钠组，进行干预，在瘢痕组 织块基底部每次注射上述相应溶液 50ul，每 3 天一次，总共 10 次，连续性观察 瘢痕的形态学变化；30 天后切下标本随后进行苏木精一伊红染色观察各组瘢痕 FB 数量和胶原表达及排列变化。 结果： （1）亚硒酸钠在 0-80 umol/L 浓度范围内，在同一时间内随着浓度的增加， 对 FB 的抑制率呈现逐步增加的趋势（P＜0.05）；在相同浓度作用下随着时间 II 万方数据 摘要 的延长，亚硒酸钠对 FB 的抑制率逐渐增加（P＜0.05）；（2）Live/dead 试剂检 测结果示，在 0-40 umol/L 浓度内，随着浓度的上升，镜下可见死细胞数逐渐增 加；（3）细胞免疫组化显示在亚硒酸钠 0-40 umol/L 浓度内，随着浓度的上升， FB 内 TGF-β1 和Ⅰ、Ⅲ型胶原、wnt-1 以及 β-catenin 蛋白表达逐渐减弱，并且 阳性细胞数逐渐减少（P＜0.05）；（4）蛋白免疫印迹结果显示随着亚硒酸钠的 浓度在 0-40 umol/L 范围内增加，wnt-1 和 β-catenin 蛋白表达逐渐降低（P＜0.