Notch1信号的激活对食管鳞状细胞癌上皮间质转化和生物学的影响.pdfVIP

摘要 摘 要 目的： 探讨 Notch-1 信号通路对 Eca-109-EMT 的调控作用，明确激活 Notch-1 信 号通路后对 Eca-109 的增殖、凋亡、迁移能力的影响。 方法： 明确 Notch-1 信号通路调节食管鳞状细胞癌 EMT 的作用机制，将实验分为 Control、DMSO、MOCK、N1ICD、TGF-β 1、DAPT+ TGF-β 1、DAPT 组，N1ICD 慢病毒过表达载体（LV-N1ICD）转染 Eca-109 上调 Notch-1 信号通路。72h 后根 据分组情况分别加入 5ng/ml TGF-β 1 诱导 Eca-109 发生 EMT 和 15μmol/mlDAPT 抑制 Eca-109 发生 EMT，48h 后 CCK-8 检测细胞活力；Western –blotting 检测 E-cadhenrin、Vimentin、Notch-1、Hes-1、Hey-1、Jagged-1 蛋白的表达变化；5 周后用结晶紫染液对克隆细胞进行染色并计数；观察 Eca-109 24h 内迁移能力的 变化；AnnexinV/PI 对 Eca-109 染色并检测细胞凋亡情况。 结果: 1． CCK-8 检测细胞活力结果示： Eca-109 在 N1ICD 组中增殖活力最强， 与 Control 组、MOCK 组、TGF-β1、TGF-β1+DAPT、DMSO、DAPT 组比较具有 显著性差异（P0.05）。 2．细胞克隆计数结果示：N1ICD 组与 Control 组、MOCK 组、TGF-β1、DAPT+ TGF-β1 和 DMSO、DAPT 组比较，Eca-109 克隆形成率及数量最多，统计学差 异比较明显（P0.05）。 3. 划痕试验结果显示：N1ICD 组与 Control 组、MOCK 组、TGF-β1 、 TGF-β1+DAPT 和 DMSO、DAPT 组比较，Eca-109 细胞划痕愈合明显，统计学 差异明显（P0.05）。 4. 细胞自动分析和分选装置检测细胞凋亡结果示： N1ICD 组与 Control 组、 MOCK 组、TGF-β1、DAPT+ TGF-β1 和 DMSO、DAPT 组比较，Eca-109 细胞凋 亡率显著减少，有显著的统计学差异（P0.05）。 5. Western-blotting 检测结果显示：在 N1ICD 组中，E-Cadherin 蛋白表达量 明显减少，??? Control 组、MOCK 组、TGF-β 1、DAPT、DAPT+TGF-β1 和 DMSO 组比较有显著性差异（P0.05）； Vimentin、Notch-1、Hes-1、Hey-1、Jagged-1 II 万方数据 摘要 等蛋白表达量明显增多，与 Control 组、MOCK 组、 TGF-β1、DAPT、DAPT+ TGF-β1 和 DMSO 组比较有显著性差异（P0.05）。 结论： N1ICD 慢病毒过表达载体（